细菌实验诊断技术与质量控制VIP免费

第六章细菌实验诊断技术与质量控制一、教学大纲要求1、掌握临床常见标本的细菌学检验程序和方法2、掌握细菌学检验的形态学检查方法3、掌握细菌的分离培养技术和方法4、掌握细菌代谢产物检测与鉴定技术5、掌握细菌检验的质量控制6、了解细菌感染的分子生物学检测技术、细菌感染免疫学检测、细菌毒素的检测、细菌自动化检测技术。二、教材内容精要（一）标本采集、处理与检测标本采集的基本原则：尽早采集、根据可疑的病原体，选择不同采集时机和标本种类、在抗生素应用前采集、遵守无菌操作、正确保存和运送。容器应密封不易碎，标本不得污染容器的口和外壁。1.血液标本正常人的血液是无菌的。当细菌侵入时可引起严重的菌血症或败血症。一般情况下在患者发热初期或发热高峰时采集；持续性菌血症可随时采集；间歇性菌血症，应预测其体温上升期进行采血。一般在使用抗生素前采集2~3次；多部位采集，如两侧肘静脉或动、静脉同时采取；对于已使用抗生素而无法停止的患者，也应在下次用药前采取。在感染局部的附近血管中采血，可提高阳性率。采血量成人一般5~10ml，婴幼儿1~2ml。采集的血液标本注入培养瓶中先进行增菌培养，培养基和血液标本量的比例应>10：1，将血液中的各类杀（抑）菌物质充分稀释。需氧菌常用培养基有胰酪蛋白大豆胨肉汤和葡萄糖酚红肉汤等，常加入对氨基苯甲酸（PABA）50μg/ml中和磺胺类，青霉素酶2单位/ml破坏青霉素类，硫酸镁中和链霉素、四环素、土霉素、金霉素、新霉素及多粘菌素等抗生素。加入0.03~0.05%的聚茴香磺酸钠（sodiumpolyanetholsulfonate,SPS）可抑制血清中的抗菌物质，并对氨基糖苷类和多肽类抗生素有灭活效果。并加入Ⅹ、Ⅴ因子等生长因子。培养瓶每天观察一次。如发现①培养瓶内液体浑浊；②血球层上面出现颗粒状的生长物，并且有自下而上的溶血；③有明显的凝块；④液体表面有菌膜，培养液清晰或浑浊等表明有细菌生长。直接进行涂片染色初步报告。同时分别接种血平板、巧克力（色）平板普通培养和5%CO235℃培养。也可直接进行体外药敏试验。无细菌生长迹象的培养瓶孵育至第7d，接种血平板、巧克力（色）平板，分别进行普通培养和5%CO2环境35℃孵育24h。为了提高检出的速度，在培养的第2~3d时应移种一次。有厌氧菌感染时，同时注入需氧瓶和厌氧瓶，厌氧培养基通常用硫乙醇酸盐培养基、牛心脑浸液肉汤等；培养液中有刃天青，无氧时无色，有氧时呈红色。需氧瓶和厌氧瓶同时浑浊，或需氧瓶无生长而厌氧瓶液体浑浊，提示厌氧菌生长。分别接种血平板和厌氧血平板，置需氧和厌氧环境中，如果都只生长1种细菌，则为兼性厌氧菌；如果仅在厌氧环境中生长，可以直接报告“有厌氧菌检出”。若长期应用抗细胞壁类抗生素，应考虑细菌L型存在，将血液接种高渗培养基中，分别进行需氧、厌氧和5%CO2环境培养。每周移种2~3次于高渗固体培养基上，观察有无细菌L型菌落生长。2.呼吸道标本正常上呼吸道有正常菌群。下呼吸道正常情况下无细菌或仅有少量细菌侵入咽拭子直接涂片检查怀疑白喉的标本，应立即进行涂片革兰染色和异染颗粒染色。如发现有呈Y、V、T等排列的棒状杆菌，有异染颗粒时可报告“找到有异染颗粒的革兰阳性杆菌”。也可用特异性的荧光染色法检查A群溶血性链球菌和百日咳鲍特菌。培养检查接种血平板，观察细菌的生长情况。有无特别的菌落生长，如为上呼吸道的正常菌群，比例大致正常，则报告“未检出致病菌”；如果某一种菌群明显占多数或接近纯培养，应考虑该菌与疾病有关，鉴定后报告。呼吸道标本特殊菌的培养百日咳鲍特菌接种在鲍-金（Border-Gengou）平板；白喉棒状杆菌接种吕氏血清斜面或鸡蛋培养基，同时接种亚碲酸钾血平板；脑膜炎奈瑟菌带菌者的鼻咽拭子35℃保温运送，尽快接种在35℃预温的卵黄双抗平板上，置3~5%CO2环境中35℃孵育24h。流感嗜血杆菌用巧克力平板或选择性平板。化脓性A群链球菌的接种血平板，在接种原始区贴一张0.04U的杆菌肽纸片作为A群链球菌存在的指示。痰液标本，采集晨痰为好。观察标本的性状，选取脓血性的部分，如发现有颗粒、菌块及干酪样物，可能是放线菌或真菌感染。有异常恶臭，与厌氧菌有关。直接涂片染色检查发...