文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页次1/9微生物检验SOP核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页次2/9异动日期修订者版本文件异动记录2008.12.19A新制定2009.2.18B修改2009.3.10C修改2009.7.02D修改文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页次3/91.目的：为无菌操作及无菌室的环境保护，提供一个标准化规程防止微生物污染，使微生物检验能达到相关要求，并规范微生物检验流程。2.适用范围：适用于公司所有原材料、半成品、成品、环境卫生等微生物的检测。3.权责：3.1主管：督导检验之正常运作，检测标准及卫生标准的建立，整理归纳检验数据等。3.2检验员：依各类产品标准执行检验、标示与报表的整理，环境卫生的管控与相关事项的沟通与处理。4.参考文件：4.1食品中霉菌和酵母分布、检测和鉴定、双料操作方法、微生物实验室标准。4.2GB15979—次性使用卫生用品卫生标准5.定义：无6.作业内容（如下）6.1准备工作：6.1.1根据当天生产安排单、原料、研发样品结合实际工作量等预估当天检样量。6.1.2根据待检样数量配制试剂，领取整瓶试剂时填写试剂台账本。6.1.3准备试验工具：剪刀、勺子、涂抹用的标尺、酒精灯、打火机、果汁机、刻度吸管、电子秤、乳胶帽、吸尔球、试管架、记号笔、75%酒精等。6.1.4配制生理盐水和培养基：生理盐水浓度为0.85%；培养基的配制根据培养基标签上的说明配制。6.1.5分装：生理盐水为每锥形瓶135ml；大肠菌群培养基单料吸取10ml放入有小导管的小试管中，大肠菌群培养基双料吸取10ml放入有小导管的大试管中。双料及单料管操作说明见附表1。6.1.6培养基及用具杀菌：先将杀菌锅中注入软化水；再把分装好的生理盐水、大肠菌群培养基、菌落总数培养基、霉菌及酵母菌培养基、刻度吸管、取样用的锥形瓶或专用塑料瓶、平皿、使用的窗体使用的工器具发布试剂台账本核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页次4/9取样勺等放入灭菌锅进行湿热灭菌：121°C、20min或115°C、15—20min。6.1.7将杀菌好的生理盐水、刻度吸管、平皿、剪刀、取样勺等摆放在无菌操作台上，并将杀菌好的培养基放在水浴锅中保温，防止培养基凝固。6.2取样6.2.1准备取样工具(75%酒精喷壶、酒精灯、打火机、镊子、无菌水、无菌取样瓶等)。6.2.2进车间前穿好工作服及鞋套，戴好口罩及工作帽。6.2.3取样时一切保持无菌操作，取样完毕后将待测样品进行编号，从1开始编号，冋时记录在微生物记录本上依次登记。登记时注意将品名、生产日期等信息详细记录。6.3无菌室杀菌6.3.1工作服、帽子、口罩、鞋套按规定放在缓冲间；把实验所需工具摆放在工作台上；配制100ppm以上的消毒水放于更衣室缓冲间。6.3.2打开紫外灯杀菌，杀菌时间±30min。6.3.3人员在关闭紫外灯至少30min后方可入内工作。6.4进入无菌室操作流程6.4.1工作人员进入无菌室缓冲间先将手部用消毒水浸泡30-60秒，再更换消毒过的工作服、帽子、口罩，穿上鞋套方可进入无菌室进行操作。6.4.2以无菌操作称取检样15ml(g)，注入135ml(g)灭菌生理盐水的锥形瓶中，振摇均匀，即为1：10样液。用刻度吸管吸取1ml样液注入无菌的平皿中，冋时用记号笔在平皿侧面写上当天日期及样液的编号；用刻度吸管分别吸取1ml样液注入无菌的单料和双料试管中，并在试管架上做标记。6.4.3取样时每次使用前后须通过火焰灼烧灭菌，待冷却后方可接样。培养皿中培养基冷却后倒置于培养箱中(大肠菌群36±1C，24±2h；菌落总数36±1C，48±2h；霉菌酵母菌为25C—28C,第三天开始观察，共观察五天)。使用的窗体使用的工器具发布微生物实验室仪器设备使用记录表核准：审核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15文件名微生物检验SOP文件编号C05主办部门研发品管部版本别D页次5/96.5读数6.5.1菌落总数的读数6.5.1.2平板菌落数的选择：选取菌落数在30〜300之间的平板作为菌落总数测定标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数，其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片...
