实验三尿药法测定核黄素片剂消除速度常数【实验目的】1、熟悉尿药法在生物药剂实验中的应用2、掌握尿药法计算消除速度常数等动力学参数的方法【实验原理】药物在体内的吸收、分布、代谢、排泄等过程既有区别,又有联系,观察一个方面的变化,常可间接地认识到另一方面的情况,所以药物在体内的速度过程变化规律,既可用血药法来估算,也可用尿药法来估算。在多数情况下,尿药浓度高于血药浓度,定量分析精密度好,测定方法较易建立,而且取样方便,受试者可免收多次抽血的痛苦。因此,在体内药物大部分以原形从尿中排除条件下,通常可用尿药法估算消除速度常数、生物半衰期等动力学参数。尿中原形药物的瞬时排泄速度,可用下列微分式表示:dXuKeX(1)dtKe为表观一级排泄速度速度,Xu为t时间尿中原形药物的累计排泄量,X为t时间体内存有的药量。在静脉给药时,体内药量的经时过程可由下式表示:XXoekt(2)Xo为给药剂量,K为表观一级消除速度常数。将(2)式中X值代入(1)式后得:dXuKeXoekt(3)dt两边取对数得:logdXuKtlogKeXo(4)dt2.303由(4)式可见,原形药物排泄速度得对数对时间作图为一直线,其斜率为-K/2.303,与血药浓度的对数对时间作图所求的斜率相同。(4)式适用于静脉给药后求算消除速度常数。若口服给药,则体内药量经时过程可由下式表示:XKaXoFKt(eeKat)(5)KaKKa为表观一级吸收速度常数。尿中原形药物的瞬时排泄速度可由(5)式代入(1)式得:dXuKeKaFXoKt(eeKat)(6)dtKaK当Ka>K,t充分大时,则e-Kat→0,(5)式简化为:dXuKeKaFXoKte(7)dtKaK两边取对数得:logdXuKKFXKt(8)logeaodtKaK2.303由上述关系式可见,若以logXu/dt对t作图,可得到一条二项指数曲线,从其后段直线得斜率可求出一级消除速度常数K。由于尿中原形药物排泄速度得瞬时变化率是不可能实验方法求算得,通过实验只可求出平均排泄速度,设在一段时间间隔△t内药物得排泄量为△Xu,则平均排泄速度为△Xu/△t,这样(4)或(8)式可改写如下:logdXuKlogKeXot中(9)dt2.303logdXuKKFXKlogeaot中(10)dtKaK2.303由于实验中采取平均排泄速度,求得的消除速度常数K会出现一些误差。但若以恒定的时间间隔集尿,其时间间隔不大于一个药物的半衰期时,则仅发生较小偏差。【实验内容与操作】一、服药及尿样收集1服药前一天收集24小时尿液,每次收集尿液后量体积,取10ml保留,其余倒掉。2临服药前排空小便3早餐后立即服用核黄素片3片(5毫克/片),用温水250ml吞服不咀碎,记录服药时间。4按服下药片后的第2、4、6、8、10小时收集尿液,用量筒量取并记录尿液体积,然后,将尿液倒入盛有0.2ml冰醋酸的刻度试管内至20ml,摇匀,于阴凉避光处保存。注意点:1.每次收集尿液后饮200ml左右水以维持尿量。2.每次大便时收集小便,切勿损失。3.试验期间(包括服药前一天)控制食谱,不能吃含有核黄素的食物,如:蛋类、牛奶、麦乳精、奶糖等。并不得服用含有B族维生素的药品。二、尿液中核黄素含量的测定1原理:核黄素的异咯嗪环上具有活泼的双键,能接受和放出氢原子,在保险粉(连二亚硫酸钠)的作用下,能还原为无色双氢核黄素,利用这一特性,可以由加入保险粉前后二次测得的吸收度(核黄素在波长444nm处有吸收)的差值,来计算尿液中核黄素的含量。2方法:(1)标准曲线的制备:精密称取105℃干燥2小时的核黄素对照品50mg于500ml量瓶中,加0.02mol/L醋酸液稀释300ml,置水浴加热溶解后,放冷至室温,用0.02mol/L醋酸液稀释至刻度,摇匀即得,每1ml中含核黄素100微克,然后加入甲苯覆盖上面,置凉暗处保存。精密吸取标准液0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0ml分别置于10ml量瓶中,用酸化蒸馏水(每100ml蒸馏水中含有1ml冰醋酸)稀释至刻度,摇匀。以酸化蒸馏水作空白,在444nm波长处测定吸收度,然后,在每管中各加保险粉约3mg,摇匀。在一分钟内再次测定吸收度。两次测定值之差,即为核黄素的吸收度,以此值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线。(2)尿样中核黄素含量测定尿样测定照标准曲线制备项下的方法。从“以酸化蒸馏水作空白”...