人角膜内皮细胞株的建立与组织工程人角膜内皮的体外重建[1]VIP免费

书第４６卷第１０期Ｖｏｌ．４６Ｎｏ．１０山东大学学报（理学版）ＪｏｕｒｎａｌｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ）２０１１年１０月Ｏｃｔ．２０１１收稿日期：２０１１０８１２；网络出版时间：网络出版地址：基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３计划）资助项目（２００６ＡＡ０２Ａ１３２）作者简介：樊廷俊（１９６４－），男，理学博士，教授，博士生导师，主要研究方向为动物细胞工程与角膜组织工程．Ｅｍａｉｌ：ｔｊｆａｎ＠ｏｕｃ．ｅｄｕ．ｃｎ文章编号：１６７１９３５２（２０１１）１０００００００人角膜内皮细胞株的建立与组织工程人角膜内皮的体外重建樊廷俊，马西亚，赵君，胡修忠（中国海洋大学角膜组织工程重点实验室，山东青岛２６６００３）摘要：为了体外重建出可用于角膜移植的组织工程人角膜内皮（ＴＥＨＣＥ），本文从业已建立的非转染人角膜内皮（ＨＣＥ）细胞系中筛选出单克隆细胞株（ｍｃＨＣＥ），并以其为种子细胞对ＴＥＨＣＥ的体外重建进行了研究。经有限稀释法从非转染ＨＣＥ细胞系筛选出了ｍｃＨＣＥ细胞株，形态结构、染色体分析以及细胞连接蛋白和膜运输蛋白的检测结果显示，ｍｃＨＣＥ２４０１单克隆细胞株细胞具有正常而稳定的形态、结构和二倍染色体核型，并能表达细胞连接蛋白和膜运输蛋白，具有ＴＥＨＣＥ种子细胞的理想特征。以ｍｃＨＣＥ２４０１细胞为种子细胞、以去上皮层修饰羊膜（ｍｄＡＭ）为载体支架体外重建出了ＴＥＨＣＥ，形态结构鉴定结果显示，多角形ｍｃＨＣＥ２４０１种子细胞在ｍｄＡＭ上形成了连续、完整的细胞单层，在细胞之间以及细胞与ｍｄＡＭ之间均形成了广泛的细胞连接，单层细胞密度高达３６０２２２±４５２２个／ｍｍ２（相当于０～３岁孩童ＨＣＥ的细胞密度），所重建单层角膜内皮的形态结构与在体ＨＣＥ高度近似。可见，本文成功建立了形态结构、核型以及功能蛋白表达正常的单克隆细胞株，并利用ｍｃＨＣＥ２４０１细胞和ｍｄＡＭ在体外成功重建出了形态结构与与在体ＨＣＥ高度近似的最“年轻”的ＴＥＨＣＥ，有望作为捐献角膜内皮的等效替代物用于角膜内皮异常疾病的临床治疗。关键词：人角膜内皮细胞；单克隆细胞株；去上皮层修饰羊膜；组织工程人角膜内皮；重建中图分类号：Ｒ３１８／２７６７文献标志码：ＡＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆａｈｕｍａｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｔｒａｉｎａｎｄｉｎｖｉｔｒｏｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆａｔｉｓｓｕｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｈｕｍａｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍＦＡＮＴｉｎｇｊｕｎ，ＭＡＸｉｙａ，ＺＨＡＯＪｕｎ，ＨＵＸｉｕｚｈｏｎｇ（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＣｏｒｎｅａｌＴｉｓｓｕｅＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＯｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎａ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６００３，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｔｉｓｓｕｅｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｈｕｍａｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ（ＴＥＨＣＥ）ｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒｃｏｒｎｅａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ，ｔｈｉｓｓｔｕｄｙｗａｓｉｎｔｅｎｄｅｄｔｏｓｃｒｅｅｎｏｕｔｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｃｅｌｌｓｔｒａｉｎｓｆｒｏｍａｕｎｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｈｕｍａｎｃｏｒｎｅａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ（ＨＣＥ）ｃｅｌｌｌｉｎｅ，ａｎｄｒｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔＴＥＨＣＥｉｎｖｉｔｒｏｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅｓｅｃｅｌｌｓａｓｓｅｅｄｅｒｃｅｌｌｓ．ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌｃｅｌｌｓｔｒａｉｎｓｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄｏｕｔｆｒｏｍｔｈｅＨＣＥｃｅｌｌｌｉｎｅｂｙｌｉｍｉｔｄｉｌｕｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓｏｆｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅａｎａｌｙｓｉｓ，ｃｏｍｂｉｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｅｌｌｊｕｎｃｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓａｎｄｍｅｍｂｒａｎ...