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动物源性食品中氯霉素类药物的LC-MSMS定量分析方法VIP免费

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56一、背景氯霉素(Chloramphenicol)是一种广谱抗生素,其对伤寒杆菌、流感杆菌、副流感杆菌和百日咳杆菌的作用良好,对立克次体感染如斑疹伤寒也有效,但对革兰阳性球菌的作用不及青霉素和四环素。氯霉素对人类的毒性较大,它会引起再生障碍性贫血、新生儿灰色综合症等疾病,尤其是氯霉素的低浓度药物残留会诱发致病菌的耐药性。食品中氯霉素的残留不但对人体造成危害,而且该药已在国外较多国家禁用,严重影响我国食品的出口,因此准确测定食品中氯霉素的残留量具有重要意义。目前《GB/T22338-2008动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》中详细介绍了水产品、畜牧产品和畜牧副产品中氯霉素类化合物残留量的气相色谱-质谱和液相色谱-质谱法,方法中采用内标法定量检测氯霉素,以及外标法对甲砜霉素和氟甲砜霉素进行定量。本文中将详细介绍采用ABSCIEX3200QTRAP®LC-MS/MS检测氯霉素,并且经实验证实ABSCIEXAPI4000™系列、API5000™以及API5500™系列同样适用于该方法。二、化合物信息动物源性食品中氯霉素类药物的LC-MS/MS定量分析方法表1.化合物基本信息化合物英文通用名分子量CAS分子式氯霉素Chloramphenicol323.156-75-7C11H12Cl2N2O5甲砜霉素Thiamphenicol355.015318-45-3C12H15Cl2NO5S氟甲砜霉素Florfenicol357.073231-34-2C12H14Cl2FNO4S三、前处理方法(GB/T22338-2008)1.样品提取1.1.动物组织(肝、肾除外)与水产品称取试样5g(精确至0.01g),置于50mL离心管中,加入100µL氯霉素氘代内标(氯霉素-D5)工作溶液和30mL乙腈,匀浆,离心5min。将上清液转移至250mL分液漏斗中,加入15mL乙腈饱和的正己烷,振荡5min,静置分层,转移已经层至100mL棕色心形瓶中。残渣中再加入30mL乙腈,振摇3min,离心5min,取上清液转移至同一分液漏斗,振荡5min,静置分层,转移乙腈层至同一棕色心形瓶中。向心形瓶中加入5mL正丙醇,于40℃水浴中旋转蒸发近干,用氮气吹干,加5mL丙酮-正己烷(1+9)溶解残渣。1.2.动物肝、肾组织称取试样5g(精确至0.01g),置于50mL离心管中,加入30mL乙酸钠溶液,均质2min,加入300µLβ-葡萄糖醛酸苷酶,于37℃温育过夜。消解样品中加入100µL氯霉素氘代内标(氯霉素-D5)工作溶液和20mL乙酸乙酯-乙醚(75+25),振荡2min,离心5min。取上层有机层入心形瓶中,在40℃水浴中旋转蒸发近干,用氮气吹干,加5mL丙酮-正己烷(1+9)溶解残渣。1.3.蜂蜜称取蜂蜜试样5g(精确至0.01g),置于50mL离心管中,加入100µL氯霉素氘代内标(氯霉素-D5)工作溶液,5mL水混匀。再加入20mL乙酸乙酯,振摇2min,离心5min,移取有机层到100mL棕色心形瓶中。于离心管中在加入20mL乙酸乙酯,振摇2min,离心5min,合并有机层至同一棕色心形瓶中,于40℃水浴中旋转蒸发至干,加3mL水溶解残渣,混匀。57动物源性食品中氯霉素类药物的LC-MS/MS定量分析方法2.净化2.1.动物组织与水产品用5mL丙酮-正己烷淋洗LC-Si硅胶小柱,弃去淋洗液,将残渣溶解溶液转移到固相萃取小柱上,弃去流出液,用5mL丙酮-正己烷(6+4)洗脱,收集洗脱液于心形瓶中,40℃水浴中旋转蒸发近干,用氮气吹干,加1mL水定容,定容液过0.45µm滤膜至进样瓶,待测定。2.2.蜂蜜分别用5mL甲醇,5mL水活化EN固相萃取住,将提取液转移上柱,用5mL水淋洗,用玻璃棒压干1min,用3mL乙酸乙酯洗脱,洗脱液用氮气吹干,用1mL水定容,定容液过0.45µm滤膜至进样瓶,待测定。四、实验方法1.液相条件色谱柱:PhenomenexAqua2.0X50mm,5µm;柱温:45℃;流速:400µL/min;流动相:A,水;B,乙腈;梯度洗脱,洗脱条件见表2:2.质谱条件离子源:TurboV™离子源;扫描模式:负离子采集模式:多反应监测MRM表2.液相色谱条件时间(min)A(%)B(%)075150.5751545050550505.2751587515表3.氯霉素类化合物MRM离子对化合物名称母离子子离子1子离子2氯霉素321152257甲砜霉素354185290氟甲砜霉素356336185氯霉素-D5(内标)326157——582.定性线性曲线2.1.氯霉素(0.005~1ng/mL)y=1.03850e6x+895.10620(r=0.99809)(weighting:1/x^2)Levels已知浓度(ng/mL)实测浓度(ng/mL)准确度(%)10.0050.005102.620.0100.01098.730.0...

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