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GPC净化,HPLC分析猪肉样品中磺胺类药物磺胺类药物为化学合成抗菌药,常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用,通过任何途径摄入的磺胺类药物在人体中蓄积,都会引起人的过敏性反应,严重的会导致癌症。国际食品法典委员会(CAC)与欧美等大多数国家对食品与饲料中磺胺类药物残留都有限量标准,我国规定了猪肉中的磺胺类药物总量不得大于0.1mg/kg。本法采用GPC凝胶净化猪肉样品,HPLC检测目标磺胺类药物,样品前处理条件容易控制,平行性和回收率较好。1.仪器与试剂1.1仪器LabTechLC600高效液相色谱仪色谱柱:LabTechKromasilC18(250×4.6mmi.d.5.0μm)LabTechGPCCleanup800凝胶色谱净化仪(300×20mmBio-beadsS-X3填料)LabTech旋转蒸发仪EV3111.2试剂:猪肉,市售磺胺类标准品(磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉):国家标准物质中心乙腈:色谱纯;乙酸:分析纯;乙酸乙酯:分析纯;环己烷:分析纯;无水硫酸钠:分析纯;水:二次蒸馏水2方法与结果讨论2.1样品前处理2.1.1方法取5g样品(加标0.1mg/kg,1.0mg/kg)加入5g无水硫酸钠15mL乙酸乙酯均质提取2min过滤,滤渣再加入15mL乙酸乙酯,均质提取2min,过滤,合并两次滤液,浓缩近干,使用凝胶净化流动相(乙酸乙酯:环己烷1:1)定容到10mL待用。取5mL样品进行凝胶净化,通过标准品出峰时间,确定样品中目标馏分收集时间。将收集到的目标馏分转入鸡心瓶中,浓缩近干,液相色谱流动相定容,待测。2.1.2凝胶净化条件流动相:乙酸乙酯/环己烷(1/1);流速5mL/min;紫外检测波长:270nm进样量:5mL2.1.3净化收集时间的确定5.6混标1样品加标1500-50050100150200250300350400450mV36912151821242730min样品加标GPC净化谱图标准品GPC净化谱图图1样品加标GPC净化谱图将标准品和样品加标GPC色谱图进行叠加(见图1),通过标准品的出峰时间,确定样品目标物收集段。但样品中基体干扰较大,通过对不同收集段馏分进行检测,确定11.2-12.8为目标物收集段。此种情况下,夹杂在收集馏分中的基体杂质在液相上可与目标物进行分离,同时对回收率损失较小。2.2样品HPLC检测2.2.1色谱条件流动相:乙腈:0.3%乙酸水溶液=25:75流速:1.0mL/min进样量:20μL紫外检测器波长:270nm柱温:室温2.2.2标准曲线的绘制将浓度分别为1.25μg/mL,1μg/mL,0.75μg/mL,0.5μg/mL,0.25μg/mL,0.1μg/mL的标准储备液,按2.2.1的色谱条件,各吸取20μL进样分析,根据各组分的响应峰面积与相应的质量浓度进行线性回归,绘制标准曲线。各组分曲线线性关系和相关系数见表1。标准曲线图见图2-图5表1磺胺类药品各组分线性方程及相关系数(n=6)磺胺类药物线性范围(μg/mL)线性方程相关系数R2磺胺嘧啶0.1-1.25Y=96010X+60.540.9997磺胺二甲基嘧啶0.1-1.25Y=89560X+52.760.9998磺胺甲恶唑0.1-1.25Y=92990X+22050.9997磺胺喹恶啉0.1-1.25Y=79120X+24590.9996图2磺胺嘧啶标准曲线图图3磺胺二甲基嘧啶标准曲线图图4磺胺甲恶唑标准曲线图图5磺胺喹恶啉标准曲线图2.2.3样品检测将净化好的样品在2.2.2条件下进行液相检测。谱图如图6所示。图6加标样品的HPLC谱图五个重复样品加标回收率见如表2所示。表2样品加标回收率结果样品溶液(n=5)加标回收率1.0ppm0.1ppm组分名称回收率均值RSD%回收率均值RSD%磺胺嘧啶86.65.079.83.6磺胺二甲基嘧啶89.14.281.23.4磺胺甲恶唑90.23.785.54.1磺胺喹恶啉87.52.980.22.83.结论本法采用GPC凝胶净化方法,去除猪肉样品中的大部分基体物质。采用HPLC检测方法,分离分析了4种磺胺类药物,在等度的色谱条件下各组分达到基线分离,重复性良好,回收率满足样品检测要求。

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