139637多少度VIP专享VIP免费

GPC净化，HPLC分析猪肉样品中磺胺类药物磺胺类药物为化学合成抗菌药，常作为饲料添加剂在动物生产中长期应用，通过任何途径摄入的磺胺类药物在人体中蓄积，都会引起人的过敏性反应，严重的会导致癌症。国际食品法典委员会（CAC）与欧美等大多数国家对食品与饲料中磺胺类药物残留都有限量标准，我国规定了猪肉中的磺胺类药物总量不得大于0.1mg/kg。本法采用GPC凝胶净化猪肉样品，HPLC检测目标磺胺类药物，样品前处理条件容易控制，平行性和回收率较好。1.仪器与试剂1.1仪器LabTechLC600高效液相色谱仪色谱柱：LabTechKromasilC18（250×4.6mmi.d.5.0μm）LabTechGPCCleanup800凝胶色谱净化仪（300×20mmBio-beadsS-X3填料）LabTech旋转蒸发仪EV3111.2试剂：猪肉，市售磺胺类标准品（磺胺嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉）：国家标准物质中心乙腈：色谱纯；乙酸：分析纯；乙酸乙酯：分析纯；环己烷：分析纯；无水硫酸钠：分析纯；水：二次蒸馏水2方法与结果讨论2.1样品前处理2.1.1方法取5g样品（加标0.1mg/kg,1.0mg/kg）加入5g无水硫酸钠15mL乙酸乙酯均质提取2min过滤，滤渣再加入15mL乙酸乙酯，均质提取2min，过滤，合并两次滤液，浓缩近干，使用凝胶净化流动相（乙酸乙酯：环己烷1:1）定容到10mL待用。取5mL样品进行凝胶净化，通过标准品出峰时间，确定样品中目标馏分收集时间。将收集到的目标馏分转入鸡心瓶中，浓缩近干，液相色谱流动相定容，待测。2.1.2凝胶净化条件流动相：乙酸乙酯/环己烷（1/1）；流速5mL/min；紫外检测波长：270nm进样量：5mL2.1.3净化收集时间的确定5.6混标1样品加标1500-50050100150200250300350400450mV36912151821242730min样品加标GPC净化谱图标准品GPC净化谱图图1样品加标GPC净化谱图将标准品和样品加标GPC色谱图进行叠加（见图1），通过标准品的出峰时间，确定样品目标物收集段。但样品中基体干扰较大，通过对不同收集段馏分进行检测，确定11.2-12.8为目标物收集段。此种情况下，夹杂在收集馏分中的基体杂质在液相上可与目标物进行分离，同时对回收率损失较小。2.2样品HPLC检测2.2.1色谱条件流动相：乙腈：0.3%乙酸水溶液=25:75流速：1.0mL/min进样量：20μL紫外检测器波长：270nm柱温：室温2.2.2标准曲线的绘制将浓度分别为1.25μg/mL，1μg/mL，0.75μg/mL，0.5μg/mL，0.25μg/mL，0.1μg/mL的标准储备液，按2.2.1的色谱条件，各吸取20μL进样分析，根据各组分的响应峰面积与相应的质量浓度进行线性回归，绘制标准曲线。各组分曲线线性关系和相关系数见表1。标准曲线图见图2-图5表1磺胺类药品各组分线性方程及相关系数（n=6）磺胺类药物线性范围（μg/mL）线性方程相关系数R2磺胺嘧啶0.1-1.25Y=96010X+60.540.9997磺胺二甲基嘧啶0.1-1.25Y=89560X+52.760.9998磺胺甲恶唑0.1-1.25Y=92990X+22050.9997磺胺喹恶啉0.1-1.25Y=79120X+24590.9996图2磺胺嘧啶标准曲线图图3磺胺二甲基嘧啶标准曲线图图4磺胺甲恶唑标准曲线图图5磺胺喹恶啉标准曲线图2.2.3样品检测将净化好的样品在2.2.2条件下进行液相检测。谱图如图6所示。图6加标样品的HPLC谱图五个重复样品加标回收率见如表2所示。表2样品加标回收率结果样品溶液(n=5)加标回收率1.0ppm0.1ppm组分名称回收率均值RSD%回收率均值RSD%磺胺嘧啶86.65.079.83.6磺胺二甲基嘧啶89.14.281.23.4磺胺甲恶唑90.23.785.54.1磺胺喹恶啉87.52.980.22.83.结论本法采用GPC凝胶净化方法，去除猪肉样品中的大部分基体物质。采用HPLC检测方法，分离分析了4种磺胺类药物，在等度的色谱条件下各组分达到基线分离，重复性良好，回收率满足样品检测要求。