SMASMA分子检测进展分子检测进展董欣生物化学与分子生物学董欣生物化学与分子生物学2162010115229821620101152298•进行性近端型脊髓性肌肉萎缩症，简称脊髓性肌肉萎缩症（SpinalMuscularAtrophy）,SMA•SMA属于常染色体隐性遗传病，发病率为1//6000-1/10000。•临床上根据SMA发病年龄和病程的不同将其分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型•Ⅰ型（Werding-Hoffman病），又称严重型SMA、急性型SMA、婴儿型SMA，一般在两岁之前死亡•Ⅱ型，又称中间型，是一种中等程度的SMA，大多仅能存活两年•Ⅲ型（Kugelberg-Welander病），又称成人型，属于轻型脊髓性肌萎缩症，其发病年龄从一岁半至成年SMA相关基因•运动神经元生存基因——SMN•SMN基因定位于5号染色体长臂1区(sqll.2一13.3)•近端粒SMNt(SMN1)•近着丝粒SMNc(SMN2)•两者之间仅存在5个碱基的差距现有的分子诊断方法•半定量PCR•FISH•荧光实时定量PCR•PCR-RFLP•PCR-SSCP•MLPA•多重PCR结合DHPLC等。应用PCR-SSCP技术检测SMA•聚合酶链反应-单链构象多态性分析（PCR-SSCP）•PCR扩增特定靶序列•将扩增产物变性为单链，进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳•因迁移率变化会出现泳动变位，从而可将变异DNA与正常DNA区分开应用PCR-RFLP法诊断SMA•PCR-RFLP法是一种简单、快速的诊断方法•PCR-RFLP的基本原理是用PCR扩增目的DNA，扩增产物再用特异性内切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝胶电泳上分辨。不同等位基因的限制性酶切位点分布不同，产生不同长度的DNA片段条带。•在差异碱基相邻处通过反向错配引物引入错配位点T(原序列为C)，从而在SMN2的PCR产物中形成1个特异的DraI酶切位点•通过Dral对SMN1与SMN2的第7外显子PCR产物进行直接酶切以区别SMN1和SMN2•SMN1的第7外显子PCR产物(189bp)不被酶切，而SMN2的第7外显子的PcR产物可被酶切，变成165bP和24bP片段。展望•SMA分子诊断方法的多样性证明，每种分子诊断方法都不可避免地会有它自身的局限性。•SMA分子诊断技术尚有待进一步完善。•相信随着SMA基因检测的广泛开展，SMA分子诊断(包括产前基因诊断和植入前基因诊断)的准确性将进一步提高，从而为SMA患者家庭提供更可靠的遗传咨询和风险预测，降低出生缺陷的发生。Theend,thankyou!Theend,thankyou!
