β12整合素与纤维粘连蛋白联合促进卵巢癌细胞侵袭转移3VIP免费

·论著·β12整合素与纤维粘连蛋白联合促进卵巢癌细胞侵袭转移3韦德英,刘鸣33,汤春生(山东大学山东省立医院,济南250021)【摘要】目的:探讨β12整合素及纤维粘连蛋白对卵巢癌细胞粘附侵袭能力的影响和作用机制。方法:流式细胞仪间接免疫荧光染色检测人卵巢癌SKOV32S1细胞β12整合素表达。用人工基底膜粘附实验和体外侵袭实验观察经β12整合素抗体处理的SKOV32S1细胞粘附侵袭能力的变化。逆转录PCR检测β12整合素处理及与纤维粘连蛋白结合后SKOV32S1细胞基质金属蛋白酶基因表达的变化,同时用酶谱法分析细胞上清MMPs活性变化。结果:SKOV3细胞高侵袭克隆SKOV32S1均表达β12整合素,β12整合素抗体对其粘附及侵袭人工基底膜能力的抑制率分别为6918%和6517%。纤维粘连蛋白能诱导癌细胞MMP2基因表达并分泌蛋白酶,β12整合素抗体能减弱这种诱导作用。结论:β12整合素与纤粘维连蛋白结合能诱导卵巢癌细胞粘附并表达MMP2基因,分泌蛋白酶降解ECM,从而促进肿瘤侵袭转移。【关键词】结合素类;纤维连蛋白类;基质金属蛋白酶;卵巢肿瘤;侵袭,肿瘤中图分类号:R737131文献标识码:A文章编号:1004-7379(2005)03-0196-04Effectsofβ12integrinandfibronectinoninvasionandmetastasisofovariancancer.WeiDeying,LiuMing,TangChunsheng.ShandongUniversityShandongProvincialHospital,Jinan250021【Abstract】Objective:Toinvestigatetheroleofβ12integrinandfibronectininadhesionandinvasionofovariancancercellsandtheassociatedmechanism.Methods:Theexpressionofβ12integrininSKOV32S1(subcloneofSKOV3)cellswasdeterminedbyFCM.IthaseffectonadhesionandinvasionofSKOV32S1cellswasobservedwithcelladhesiontestandBoydenChamberinvasiveassay.FollowingadhesionofSKOV32S1cellstofibronectinorbeingblockedbyβ12integrinantibody,MMPsmRNAexpressionwasassayedbyreversetranscriptionpoly2merasechainreaction,andgelatinzymographywasusedtomeasuretheactivityofMMPs.Re2sults:β12integrinwasexpressedinallSKOV32S1cells.Theantibodyofβ12integrinsignificantlyinhibitedtheSKOV32S1cellsadheretoandinvadethebasementmembranematrixby6918%and6517%respectively.FibronectininducedtheexpressionofMMP2,andβ12integrinantibodydecreasedtheinduction.Conclusion:Bindingofβ12integrintofibronectincaninduceSKOV32S1celltoadherewhichcausesaseriesofsignaltransductionsincellsandexpressMMP2gene,promotesthemetastasisoftumor.【Keywords】Integrins;Fibronectins;Matrixmetalloproteinases;Ovarianneoplasms;In2vasiveness,neoplasm上皮性卵巢癌具有肿瘤细胞脱落并种植于腹膜导致广泛性腹腔内转移的特性。整合素是连接细胞691现代妇产科进展2005年5月第14卷第3期ProgObstetGynecol,May.2005,Vol.14,No.3333山东省优秀中青年科学家科研奖励基金资助课题(01BS56)通讯作者与细胞外基质(ECM)的重要的粘附分子,研究表明β12整合素能介导卵巢癌细胞粘附于腹膜[1]。纤维粘连蛋白(FN)是一种主要的ECM,可与整合素相互作用,诱发一系列细胞内信号转导机制,调节细胞的粘附、迁移、增殖和分化。本研究通过体外实验观察β12整合素及FN在卵巢癌细胞粘附侵袭人工基底膜中的作用,并观察他们对基质金属蛋白酶(MMP)活性的诱导,探讨其作用机制。1材料与方法111试剂鼠抗人β1整合素抗体(Chemicon),FITC标记的羊抗鼠IgG(北京中山生物技术有限公司),人工基底膜胶Matrigel(BD),明胶(Sigma)。PCR引物由上海博亚生物技术有限公司合成。卵巢癌SKOV32S1细胞是我们从卵巢癌SKOV3细胞分离建立的具有高侵袭能力的细胞克隆[2]。112实验方法11211β12整合素表达采用间接免疫荧光标记法,流式细胞仪检测。抗体按1μg/5×105～1×106个细胞比例稀释。11212人工基底膜粘附实验收集对数生长期SKOV32S1细胞,用β1整合素抗体4℃封闭45min,对照组加鼠同型非特异性IgG4℃作用45min。96孔培养板覆以1∶3稀释的人工基底膜胶(matrigel),20μl/孔,37℃聚合015h。每孔加预处理癌细胞悬液100μl(含2×104细胞),每组3个复孔。培养3h后弃培...