脑与神经疾病杂志年第卷第期在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中作用机制石向群杨金升王运良包仕尧摘要目的探讨在大鼠脑缺血再灌注损伤过程中对脑损伤、脑水肿形成等的影响以及作用机制。方法采用大鼠复制脑局限性缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法检测脑内蛋白,记录大鼠神经功能缺损程度、血脑屏障通透性、脑水肿程度的动态变化。结果脑局限性缺血再灌注损伤后脑内蛋白水平迅速降低,至再灌注后一小时达最低水平,至再灌注天时恢复到正常水平。脑水肿程度峰值出现在再灌注损伤第一小时、蓝最大通透率出现在再灌注损伤第一小时。神经功能缺损最重的时间点出现在再灌注损伤的第小时。分析再灌注小时伤侧半球与同时间点的神经功能缺损评分的相关性,结果显示水平与神经功能缺损评分呈负相关性一一,尸一。。结论脑缺血再灌注损伤过程中水平的迅速下降,是机体对脑损伤所作出的一种保护性反应,具有阻止血脑屏障破坏、减轻血管源性脑水肿和细胞源性脑水肿的效应。调节缺血后脑内的功能和表达水平可望成为新的治疗脑缺血再灌注损伤的靶点。关键词水通道蛋白缺血再灌注脑水肿中图分类号·文献标识码文章编号一一一,,,丫一,,,一夕,,一、,,,,,一,,①,一一一,②一一一③一,一④一即一一一,一一脑水肿一直是神经科学研究的热点之一,本研究目的在于采用免疫组织化学方法观察大鼠脑缺血再灌注损伤过程中脑内水通道蛋白水平的变化,探讨其水平的变化与脑水肿的相关性及脑卒中后脑水肿形成机制,为临床治疗、研究提供有益的线索。材料与方法作者单位兰州军区兰州总医院神经内科石向群,杨金升苏州大学附属第二医院神经内科王运良、包仁尧一、实验动物及分组选用健康成年一雄性大鼠,体重一克。大鼠分为正常组、缺血小时再灌注、、、、小时和天组,共个组,每组实验动物只。二、大鼠脑缺血再灌注损伤模型制作和成功标志模型制作参照“二方法,线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型。模型成功脑与神经疾病杂志。洲年第卷第期标志大鼠于缺血小时开始再灌注后并麻醉清醒,出现神经功能缺损,其评分与术前评分相差分以上者。未达到上述标准者视为模型制作失败,不计人实验组。因麻醉未醒和经解剖发现存在脑蛛网膜下腔出血均视为模型制作失败不计人实验组。三、研究指标及检测方法生命体征的监测经股动脉插管监测动脉血压、血气分析,在大脑中动脉闭塞前、及再灌注开始各监测一次,血压持续监测。肛表持续监测直肠温度,手术缺血麻醉期间通过瓦的灯泡加热维持体温在正常范围士之内。缺血再灌注损伤脑内水平应用兔抗大鼠单克隆抗体进行免疫组织化学检测大鼠脑缺血再灌注损伤后脑内水平的变化,为了便于定量分析、减少操作误差,将显色时间统一限定为。免疫组织化学半定量分析免疫组织化学检测法时,每批次各选取每组一只大鼠张切片,进行相同条件下的染色,每只大鼠共染色张切片批次,取均值作为该大鼠的定量值进行统计学分析,以减少由于人工操作和试剂批次不同所带来的误差。参照〕方法,依据染色强度和阳性目标的数量不同进行评分,评分分为一、共个等级。每批次均以正常组的染色强度作为标准评分并定为,稍低于正常为、中等低于正常定为、明显低于正常定为、染色结果阴性定为。,稍强于正常定为、中等强于正常定为、明显强于正常定为。脑水肿应用干湿重法测定脑缺血再灌注损伤后不同时间点脑不同区域皮质区、皮质下区水肿的程度。依据公式脑水肿程度一湿重一干重湿重,计算出脑各部分的水肿程度,以每湿重脑组织中所含水的重量表示。神经功能缺损评估参照厂的方法对缺血损伤后的大鼠进行神经功能缺损评分,用于从行为学方面反映脑损伤的程度,评分共分项·最高评分为分、最低为分。血脑屏障通透率参照众仁的方法,应用二作为示踪剂监测血脑屏障的损伤程度。在实验各时间点前小时经大鼠尾静脉按体重标准静脉注射,循环小时后,给予大鼠腹腔注射水合氯醛,麻醉,经心脏快速灌注冰生理盐水灌注压力等于。。水柱,迅速断头取脑。横断面切取损伤平面厚约的脑组织,并将其分为损伤侧皮质、皮质下和健侧皮质、皮质下四个部分,在分析天平上秤湿重,各部分组织放人匀浆器进行匀浆,匀浆液为的三氯乙酸,组织匀浆液经离心,取上清与无水乙醇混合,应用荧...
