产胆固醇氧化酶菌株的筛选与鉴定VIP免费

贵州农业科学2011，39(4)：127～129GuizhouAgriculturalSciences[文章编号]1001—3601(2011)04一0244-0127一03产胆固醇氧化酶菌株的筛选与鉴定刘文全1，王字1’¨，赵牧1，李勇1，任一兵1，程君1，冯涛1，郑晓芳1，杜佳1，王莉莉1，张雪勤1(1．攀枝花学院，四川攀枝花617000；2．重庆大学生物工程学院，重庆400044)[摘要]为获得产胆固醇氧化酶菌株，采用微生物纯化技术从动物新鲜粪便中进行分离，并对分离菌株的活性进行了测定，对活性较高的菌株进行分子生物学鉴定。结果表明：共筛选到产胆固醇氧化酶菌株36株；经酶活测定，筛选出4株对胆固醇降解活性较高的菌株；经16SrDNA基因序列分析，这4株细菌分别为无色杆菌、Lysinibacillus、假单胞菌和芽孢杆菌。[关键词]胆固醇氧化酶；筛选；鉴定[中图分类号]Q291[文献标识码]AlsoIationandIdentificatiOnOfBacteriaIStrainsProducingChoIesteroIOxidaseLIUWen—quanl，WANGYul’2’，ZHA0Mul，LIYon91，RENYi．bin91，CHENGJunl，FENGTa01，ZHENGXiao．fan91，DUJial，WANGLi—lil，ZHANGXue-qinl(1．。P口一：胁矗l^4Lfhf'，Pr酊fy，Pn辟z矗fJlHn，SlcJIH口万617000；2．Cbflegeo，BioP开gfn口口rlng，chongqfngU辟“诈，sify，l[：勋ngqi万g400044，C瓤n口)Abstract：Toobtainbacterialstrainsproducingcholesteroloxidase，bacterialstrainswereisolatedfromanimalintestinesbymicrobialpurificationtechnology．Theenzymeactivityofthesebacterialstrainswastestedandmolecularbiologycharacterofthesebacterialstrainswithhigherenzymeactivitywasidentifiedbymolecularbiology．Resultsshowedthat36bacterialstrainsproducingcholesteroloxidasewereisolated．Byenzymeactivityassay，fourstrainswithhighdegradingefficienciestocholesterolwerescreenedout，whichwereAf矗，‘D优D6口f￡Pr，Lvsi，zi6口fiZZ“s，尸sP“d07”o以口sandB口ffZZ“5．Theresultsmaylaythefoundationforfurtherapp“cationofbacterialstrainsproducingcholesteroloxidaseinfeedindustry．Keywords：cholesteroloxidase；isolation；identification胆固醇是一种甾体化合物，是所有动物细胞膜的重要组成成分，对维持动物体内正常的生理生化代谢具有重要的意义。但是，随着人们生活水平的提高，过多地从动物性来源的食物中吸取胆固醇，造成血清胆固醇含量超标。过高的血清胆固醇将引发高脂血症、动脉硬化、冠心病等一系列心血管疾病，已成为导致人类死亡的主要疾病之一【l咭]。目前，主要有5种方法来调节人体血清胆固醇含量，其中，利用生物转化法处理食品被认为是一种极为有效的方法。生物转化法是指用微生物或微生物酶分解食品中的胆固醇，该方法不会干扰人体正常代谢、不影响食品风味，对低胆固醇食品的开发具有重要意义[4]。胆固醇氧化酶能够将胆固醇氧化为胆甾一4一烯一3一酮，降低食品中的胆固醇含量，具有潜在的工业应用价值[5_6]。因此，分离产胆固醇氧化酶活性较高的菌株应用于饲料和食品工业方面具有重要意义。对此，笔者采用微生物纯化技术从动物新鲜粪便中进行了菌株分离，测定了分离菌株的活性，且对活性较高的菌株进行了分子生物学鉴定，以期为产胆固醇氧化酶活性较高菌株在饲料和食品工业上的应用研究奠定基础。l材料与方法1．1材料1．1．1新鲜粪便样品从攀枝花动物园采集动物的新鲜粪便，共7份，并标记编号，当天进行分离。1．1．2试剂生化试剂、引物和T口gDNA聚合酶，均购于上海生工及北京天根公司。1．1．3培养基1)液体富集培养基。胆固醇19／L，NH。NO。19／L，KH2P04O．259／L，MgS04·7H20O．259／L，FeS0。O．0019／L，pH7．O，加适量溴麝香草酚兰作为指示剂。超声波细胞粉碎仪振荡乳化30min。12l℃，15min湿热灭菌。2)固体筛选培养基。酵母粉59／L，吐温一801g／L，胆固醇1g／L，NH。N031g／L，KH2P040．25g／L，MgS04·7HzOO．25g／L，FeS040．001g／L，琼脂1．89／L，pH7．O，121℃、15min湿热灭菌。3)发酵培养基。酵母粉59／L，吐温一8019／L，胆固醇19／L，NH；N0319／L，KH2P04O．259／L，[收稿日期]2010—08—26；2011∞2...