!"#$、%&#$和%’($对猪胰!)淀粉酶活性的影响!洪法水!!王雪峰沈颂东苏国兴潘新法（苏州大学生物科学系，苏州!"#$$%）摘要分别研究了&’!(、)*!(和)+,(对)-（!）".淀粉酶活性影响及对其)-!(的竞争作用/结果表明三种金属离子低浓度情况下（$0###1123／4）对".淀粉酶具有激活现象，而较高浓度则抑制酶活力/&’!(、)*!(和)+,(竞争置换".淀粉酶中)-!(能力的大小是：&’!(")*!(")+,(，其抑制酶活作用大小：&’!(")*!(")+,(/关键词".淀粉酶，重金属离子，抑制常数，竞争结合学科分类号5#66随着环境污染的日益加剧，重金属离子对生物体的毒害作用越来越受到人们的关注/究其机理主要表现为破坏生物膜的完整性，影响细胞超微结构［"］和各种酶的活性［!，,］，从而降低其生物学功能，严重影响生物体新陈代谢和生长发育/亦有研究表明，低浓度的重金属离子可保持或促进生物学活性，但高浓度则表现为抑制［7#8］/".淀粉酶（9),0!0"0"）是一种)-!(依赖性蛋白酶，二聚体相对分子质量为7:$$$，含有7##个)-!(/它催化糖原或淀粉生成糊糖和还原糖，在生物体内参与糖类物质的利用和能量代谢，是一种极其重要的酶［:］/有研究工作表明，重金属离子明显降低萌发大豆、玉米和小麦的".淀粉酶活性［6，"$］，但低浓度的稀土离子能激活萌发水稻种子的".淀粉酶活性［#，%］/;+2<=+等［""］发现低浓度稀土金属离子对)-（!）".淀粉酶有激活作用，高浓度时，对脱钙".淀粉酶有抑制作用/为进一步揭示重金属及稀土金属离子对".淀粉酶活性影响的作用，本文报道&’!(、)*!(和)+,(研究对)-（!）".淀粉酶的活性影响及对)-!(的竞争结合作用/*材料与方法*+*材料猪胰".淀粉酶（6$$>／1=）为?@=1-公司产品，)-)3!、&’（)A,)BB）!、)*)3!、)+)3,、麦芽糖、,，#.二硝基水杨酸和9CDE等均为国产分析纯/*+#方法*+#+*金属离子溶液的配制：用双蒸去离子水配制$#%$1123／4的)-)3!、)+)3,、)*)3!、&’（E)）!，并用A)3和F-BA调节以上溶液，使其GA均为%/*+#+#天然".淀粉酶和脱钙".淀粉酶溶液制备：将已纯化的猪胰".淀粉酶溶液溶于GA%06的D<@H.A)3缓冲液中，使其浓度为#$123／4/将!$13，#$123／4的".淀粉酶对$0$!123／4D<@H.A)3GA%06（内含#1123／49CDE）的溶液透析7:I，再用双蒸去离子水透析7:I/*+#+(金属离子对".淀粉酶和脱钙".淀粉酶激活反应：在,13，"$123／4的".淀粉酶和脱钙".淀粉酶溶液中分别加入#$3$#%$$123／4的)-!(、)+,(、)*!(和&’!(，置于冰箱中作用!7I后，用,，#.二硝基水杨酸法测定酶活性［"!］/*+#+,&’!(、)*!(、)+,(与)-!(的竞争结合：在含有$0$##"1123／4)-!(的".淀粉酶溶液中分别加入#$$123／4和%$$123／4的&’!(、)*!(、)+,(，置于7J冰箱中作用!7I，酶液一部分用于酶活性测定（方法同上），一部分对$0$$!123／4D<@H.A)3GA%06缓冲液透析7:I后，用K)&.6%L型高频等离子体发生器（K)&.E9?，美国产）检测酶液和缓冲液中钙离子含量/#结果与分析#+*!"#$、%&#$、%’($与%-#$对!)淀粉酶活性影响反应介质中，以不加重金属离子和)-!(作为对照，分别测定了&’!(、)*!(、)+,(与)-!(对".淀粉酶及对脱钙".淀粉酶的激活和抑制作用/对天然".淀粉酶，&’!(、)*!(和)+,(在$0##7$123／4浓度范围内能显著提高酶的活性，提高幅!苏州大学“!""工程”科研基金资助项目（M5,"%$""）/!!通讯联系人/D+3：$#"!.#!!787!，9.1-@3：I2N=OHIPQN%H@N-/Q21收稿日期：!$$".$7.$6，接受日期：!$$".$#.!,·78·生物化学与生物物理进展!./0123/45’6123/75891!$$!；#:（"）万方数据度为!"#$!%&"’$(三种金属离子作用程度大小是：)*!+!,-%+!,.!+(但当浓度超过/"012／3或4"012／3时，酶活性急剧下降，表现为明显的抑制作用，其中,-%+处理的酶活性下降相对比较平缓（图5）(三种离子对酶活性抑制程度大小是：)*!+!,.!+!,-%+(三种金属离子对脱钙#6淀粉酶的激活与抑制作用所表现的趋势基本一致（图!）(,-%+在&"4!5&"012／3范围内可显著恢复酶的活性，恢复程度几乎5&&$，故在低浓度下，,-%+可作为一种超级钙对脱钙#6淀粉酶起激活作用(,.!+和)*!+在&"4!/"012／3或4"012／3范围内亦能部分恢复酶活性，恢复程度分别为7&"#$、4%"7$(三种离子作用程度大小是：,-%+!,.!+...
