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白芍总苷对系统性红斑狼疮CD4_T细胞ITGAL基因表达和启动子甲基化修饰的影响VIP免费

白芍总苷对系统性红斑狼疮CD4_T细胞ITGAL基因表达和启动子甲基化修饰的影响_第1页
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中南大学学报(医学版)JCentSouthUniv(MedSci)2012,37(5)http://www.csumed.org;http://xbyx.xysm.net463白芍总苷对系统性红斑狼疮CD4+T细胞ITGAL基因表达和启动子甲基化修饰的影响赵明,梁功平,罗双艳,陆前进(中南大学湘雅二医院皮肤科,医学表观基因组学湖南省重点实验室,长沙410011)[摘要]目的:探讨白芍总苷(totalglucosidesofpeony,TGP)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4+T细胞甲基化敏感基因ITGAL(CD11a)表达及启动子甲基化修饰的影响。方法:利用磁珠分选获得外周血CD4+T细胞,用不同浓度TGP(0,62.5,312.5和1562.5mg/L)处理SLE患者CD4+T细胞,48h后收集细胞。MTT法检测处理后CD4+T细胞的活力。定量PCR检测ITGAL基因mRNA表达水平。流式细胞术检测CD4+T细胞表面CD11a分子表达水平。亚硫酸盐测序法分析ITGAL基因启动子甲基化水平。结果:TGP处理48h后,各浓度组CD4+T细胞活力无明显差异。与对照组相比,高浓度组(1562.5mg/L)ITGAL基因mRNA表达水平显著降低(P<0.01),CD4+T细胞表面CD11a表达水平亦显著降低(P<0.01)。进一步DNA甲基化水平检测显示高浓度TGP处理组ITGAL基因启动子甲基化水平较对照组显著升高(P<0.01)。结论:TGP可通过升高ITGAL基因启动子甲基化水平降低SLE患者外周血CD4+T细胞中CD11a表达水平,初步揭示了TGP抑制SLE自身免疫反应的分子机制。[关键词]白芍总苷;系统性红斑狼疮;CD4+T细胞;ITGAL;DNA甲基化DOI:10.3969/j.issn.1672-7347.2012.05.006EffectoftotalglucosidesofpeonyonexpressionandDNAmethylationstatusofITGALgeneinCD4+TcellsofsystemiclupuserythematosusZHAOMing,LIANGGongping,LUOShuangyan,LUQianjin(DepartmentofDermatology,SecondXiangyaHospital,CentralSouthUniversity;HunanKeyLaboratoryofMedicalEpigenomics,Changsha410011,China)ABSTRACTObjective:Toinvestigatetheeffectoftotalglucosidesofpeony(TGP)onexpressionandDNAmethylationstatusofITGALgene(CD11a)inCD4+Tcellsfrompatientswithsystemiclupuserythematosus(SLE).Methods:CD4+TcellswereisolatedbypositiveselectionusingCD4beads.CD4+TcellsweretreatedbyTGPat0,62.5,312.5and1562.5mg/Lfor48h.TheMTTmethodwasusedtoassesscellviability;mRNAexpressionlevelwasmeasuredbyrealtime-PCR;proteinlevelofCD11awasmeasuredbyflowcytometricanalysis;DNAmethylationstatuswasassayedbybisulfitesequencing.收稿日期(Dateofreception):2011–09–29作者简介(Biography):赵明,博士,助理研究员,主要从事自身免疫性疾病发病机制方面的研究。通信作者(Correspondingauthor):陆前进,Email:dermatology20091@yahoo.cn基金项目(Foundationitems):湖南省科技计划重点项目(2011FJ2007);中央高校基本科研业务费专项资金资助。ThisworkwassupportedbytheKeyProgramofScience-TechnologyCommissionofHunanProvince,P.R.China(2011FJ2007)andtheFundamentalResearchFundsfortheCentralUniversities.中南大学学报(医学版),2012,37(5)http://www.csumed.org;http://xbyx.xysm.net464系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus,SLE)是一种女性易感的自身免疫性疾病,其特点为患者体内产生大量自身抗体,伴随机体多个器官受损。T细胞异常活化在SLE发生、发展过程中发挥重要作用[1]。SLE患者外周血T淋巴细胞通过大量分泌炎症因子、辅助B细胞和巨噬细胞活化加重炎症反应[2]。ITGAL基因编码淋巴细胞功能相关抗原1(lymphocytefunction-associatedantigen1,LFA1,又称CD11a抗原),表达在淋巴细胞表面,可与血管内皮细胞表面黏附分子(intercellularadhesionmolecule1,ICAM-1),形成稳定的免疫突触[3]。LFA1促进T淋巴细胞与其他免疫细胞如巨噬细胞、B淋巴细胞相互作用,在招募T淋巴细胞到炎症反应部位、抗原特异性T淋巴细胞活化、细胞毒性T细胞反应、自身杀伤细胞反应、B细胞辅助活化等过程中发挥重要作用[4]。SLE确切的病因及发病机制至今尚不十分清楚。近年来的研究结果表明T细胞DNA甲基化异常在SLE发病中起十分重要的作用。DNA甲基化是表观遗传学的重要调节机制。基因调...

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