����年第!卷第∀期北京师范大学学报#自然科学版∃%&∋()∗+&,−./0/)12&们叮∗+3∗/4.(5/67#2∗6∋(∗+8./.)9.∃����:&+。!2&。∀;<;的间接免疫荧光法显示多种动、植物细胞着丝点潘维林+∃王永潮”彭安”汪垫仁,,范舰∃摘要用硬化性肌膜炎病人;9;血清的间接免疫荣光法显示了多种动、植物细胞的着丝点,其中包括=.>一,文昌鱼、水媳、惫姗、蛆蝴、草履虫、洋葱、大蒜、吊兰、蚕豆和葫芦醉等?表明在进化不同阶段的动、植物细胞均有同源的、高度保守性的着丝点蛋白?关镇词抗着丝点抗体,间接免疫荧光法,植物细胞,着丝点分类号≅∀Α,ΒΑ!�?????��Χ≅年Δ&(&/‘’〕从一种变异的进行性系统性硬皮病#>88∃#<ΒΕ8Φ综合症∃的病人血清中发现了特异性的着丝点抗体,以间接免疫荧光法可以显示细胞着丝点的荧光斑点,从此,为着丝点蛋白的深人研究开辟了新途径?近�≅年来研究进展十分迅速,发现亮〔“’、鼠+Α,‘∃、蛙即等细胞,人‘Γ’及小鼠(,〕精子均可显示出着丝点抗原?Ε∗()5Η∗Ι等俩’∃进一步用免疫荧光法结合蛋白免疫印迹法确定了人着丝点中有�!,Χ≅和�∀≅ϑ的蛋白抗原,可与;<;血清反应,分别称之为<Ε2>一;,<Ε2>一,<Ε2>#,开创了深人研究着丝点蛋白的新领域?我们首次从硬化性肌膜龚病人血清中发现也有;<;的存在〔’≅’?本工作以系统发育不同阶段的动物,特别是植物细胞为材料,用此种<;<血清的间接免疫荧光法探讨它们之间是否存在同源性#过去已进行了初步报导<”,’“〕∃,为进一步研究着丝点蛋白的演化、结构与机能打下基础。+材料与方法�?�离体培并细胞的处里所用细胞有=.+∗,=.ΚΛ,<=Μ,84?ΑΦΑ,<=工,=卜Γ≅等?培养液用Ε∗1+.ΔΕΔ,加人�≅Ν小牛血清,�≅∋ΟΠΘ青霉素及�≅Π1ΟΘ链霉素,在<≅孵箱中,Α!6培养?取样前用≅?≅ΡΠ1ΟΘ秋水仙酞胺阻断ΛΑΗ,以≅?ΡΝ胰酶消化,分离细胞,≅?≅!ΡΠ&+ΟΘϑ<Σ液低渗处理,用细胞离心机#英国8Η∗)Τ&)∃将细胞离心于盖片上。�?动物细胞的制取水昌鱼#−,二Η佃匆?“肠了‘Η.叮云5咖1+。二宕Υ∃#采自青岛∃,用≅?≅ΡΝ甲醛杀死动物,取其肌节ς水媳#=洲(∗、+1。沁“二哪∗∃取整个动物,直隶环毛划#尸肠,礴苏仍∗才59从“哪‘5∃取消化道,在清水中洗净。上述材料分别用剪刀剪碎,???????国家自然科学荃金和国家教委博士点基金资助项目作者单位?�∃北京师范大学生物系,�≅≅Χ!Ρ,北京市新外大街,么∃北京协和医院皮肤科,≅≅!Ρ≅,北京市东单Α条收稿日期?��≅≅一�一�∀,修回日期Υ��≅�一≅Ρ一�Γ第∀期潘维林等Υ;9;的间接免疫荧光法显示多种动、植物细胞着丝点∀已!?口口??曰??口经≅?Ρ纬胰酶与≅?≅ΝΕΤΦ;在Α!6温箱中处理Α≅Π/),以滴管吹打分散细胞,>−8洗次,以细胞离心机制片。黄鳝#对口。>坛阳Υ∗+加5∃用冷冻切片机将肝切成�Ρ林Π厚切片,贴在盖片上?大草履虫#>∗(∗Λ‘“、9∗耐∗6。,∃用细胞离心机将细胞离心在盖片上?盘撕#‘∗,>5&9+.石Υ5>·∃以!ΡΝ酒精消毒腹部,用剪刀剪开腹壁,取出精巢,在>−8中冲洗,剪除外膜,剪碎精巢,在≅?ΡΝ胰酶加≅?≅肠ΕΤΦ;中Α!6消化�≅Π/),在≅?≅!ΡΠ&+ΟΘϑ<Σ中低渗处理�ΡΠ/),用细胞离心机将细胞离心在载片上?�?Α植物细胞的处理高等植物中各取�粒小麦#Φ而‘众。、。服郎9娜∃、玉米#儿∗,∗75∃、大豆#‘勺“。,∗Ω∃、蚕豆#:众依,“Ξ∗∃的种子,加水令其吸胀,然后放在垫有湿滤纸的培皿中在室温下培养发芽?洋葱#;Σ石“,“>∗∃、大蒜。以‘“,5∗红、,劝在室温中加水培养?剪取上述植物的根尖各≅?Α恤?取吊兰#<再加口>再76“,‘“户。Υ邵∃叶剪碎?低等植物取葫芦醉#凡、,玩妙群Λ介‘9∗直.ΨΙ∃地上部分?将上述各种植物的取材分别用Α写果胶酶加ΑΝ纤维素酶混合液消化,Ρ℃中ΑΛ5Η,将细胞涂于盖片卜,微干,浸火棉胶液,空气干燥。�?∀细胞固定将贴在盖片上的动、植物细胞用新配制的>Θ>固定液#�Ν多聚甲醛,≅?≅�Ν2∗ΣΜς,≅?≅!ΡΠ&+ΟΘ盐酸一赖氨酸,&?≅Α!ΡΠ&+ΟΘ磷酸缓冲液,Κ=!?Ψ∃,在∀6中固定≅Π/),再用>−8洗ΑΠ/),经≅?≅ΡΝΦ(/6&)Ω一�≅≅Ο>−8消化ΑΠ/),>−8洗5Π/)?(5间...
