11自身抗体检测的质量控制第二军医大学长征医院仲人前www.clinimmunchina.comrqzhong@yahoo.com21971年美国风湿病协会制定的SLE诊断标准1.脸颊红斑2.盘状红斑3.光敏型皮炎4.口腔或鼻咽部溃疡5.关节炎6.浆膜炎：胸膜炎或心包炎7.肾脏疾病（尿蛋白>0.5g/24h或+++持续，管型:红细胞、颗粒型）8.神经系统异常：癫痫或精神病（除药物或其它原因）9.血液异常（溶血型贫血或白细胞减少或淋巴细胞减少或血小板减少）31982年美国风湿病协会制定的SLE诊断标准1.脸颊红斑2.盘状红斑3.光敏型皮炎4.口腔或鼻咽部溃疡5.关节炎6.浆膜炎：胸膜炎或心包炎7.肾脏疾病（尿蛋白>0.5g/24h或+++持续，管型:红细胞、颗粒型）8.神经系统异常：癫痫或精神病（除药物或其它原因）9.血液异常（溶血型贫血或白细胞减少或淋巴细胞减少或血小板减少）10.免疫学异常：dsDNA抗体阳性或LE细胞阳性或Sm抗体阳性或梅毒血清试验假阳性11.ANA阳性（无已知的药物诱导性狼疮）敏感度96.7%；特异性96％41997年美国风湿病协会制定的SLE诊断标准1.脸颊红斑2.盘状红斑3.光敏型皮炎4.口腔或鼻咽部溃疡5.关节炎6.浆膜炎：胸膜炎或心包炎7.肾脏疾病（尿蛋白>0.5g/24h或+++持续，管型:红细胞、颗粒型）8.神经系统异常：癫痫或精神病（除药物或其它原因）9.血液异常（溶血型贫血或白细胞减少或淋巴细胞减少或血小板减少）10.免疫学异常：dsDNA抗体阳性或LE细胞阳性或Sm抗体阳性或磷脂抗体阳性(抗心磷脂抗体、或狼疮抗凝物、或梅毒血清试验假阳性)11.ANA阳性（无已知的药物诱导性狼疮）5VenusWilliams1980.6.17185cm,75kg43champingtitles597win/147lostMichaelJackson1958.8.29-2009.6.25180cm,60kg2timescandidateforNobelPeace62789自身抗体检测的质量控制—间接免疫荧光法（Hep2细胞）•初筛方法：间接免疫荧光法，底物是Hep2细胞。•在早期，自己制备Hep2细胞底物。现在已有商品化的产品，并得到标准化。•同样Hep2细胞，不同实验室检测结果不尽相同。10一、分析前的试剂和检测准备（一）HEp-2细胞�玻片上细胞密度合适和分布均匀；�有丝分裂细胞数：200倍高倍镜下每个视野至少有3-5个有丝分裂相细胞；�形态学稳定；�背景荧光11注意：�表达相关抗体的靶抗原；建议丙酮固定细胞（而不是甲醇或乙醇），从而保留足够的SSA(Ro)和nRNP抗原，以免洗涤时流失；•细胞含量多的：DNA,histones,Sm,nuclearRNP,andSS-B/La•细胞含量少的：SS-A/Ro,PCNA,RANA,andKuantigens•以前ANA阴性SLE中常含SS-A/Ro抗体12（二）检测场所1.应有单独的区域进行检测操作和荧光显微镜观察；2.确保低水平的尘埃，这对免疫荧光实验室尤为重要；3.显微镜室至少能容纳二个人同时工作。带有高压汞灯的显微镜产热不少，故应通气良好；4.实验室计算机联网有利于简化工作程序和记录。LIMSEUROLabOfficeEUROPictureEUROStarIIDASAP16/22IF-PS(ImmunofluorescencePositioningSystem)313（三）标本采集和保存1.本实验用血清；2.血清保存在4◦C，72小时内可用；如保存于-20◦C或更低，可用时间则更长（不要反复冻融）一、分析前的试剂和检测准备14（四）抗人IgG荧光抗体用已知荧光图型和终点滴度的阳性血清进行连续稀释而确定工作稀释度工作稀释度30－60μg/ml特异抗体含量≥0.1抗体/蛋白比值约3.0，比值增高可增加非特异性着染或滴度FITC/蛋白比值IgG特异性；亦可用多价结合物，但可检测到较多的无临床意义的抗体同种特异性抗人IgG荧光抗体推荐特性一、分析前的试剂和检测准备15二、检测程序（一）标本处理1.分析前程序并非关键。但对溶血、脂血和黄疸应作记录，因有可能影响检测系统(增强非特异荧光背景)；2.分析过程必须按照厂方说明进行；3.孵育时间、标本稀释或缓冲系统的差异均能影响结果，故应对方法学进行确认。标本处理过程常在常温下进行（20-24◦C）。4.如同时用不同厂家产品，必须注意使用统一的玻片、缓冲系统及二抗等；165.注意过期日期及试剂的正确贮存条件。如二抗，贮存不当会导致自身抗体效价明显下降；6.建议实验室各自建立每种玻片的最佳容量并写入SOP中；7.每个孵育过程应放在潮湿箱内以防标本干燥；8.PBS稀释的血清加在单层HEp-2细胞上，绝不...
