第3o卷第4期山东医科大学学撮Vo1．30No。41992年12月ACTAACADEMIAEMEDICINAESHANDO：NODec．1992不同工艺胆红素异构体的测定及抗氧化性姬胜利张天民R'77(生化制药学教研室)内容提要以猪胆汁为原料，用钙盐法(A法)，包括盐酸酸化(AI)、醋酸酸化(A2)和盐酸一醋酸联合醢化(A3)，直接苹取法(B)和离子交换法(C)提取胆虹素。A3法和B法收率最高。以反相HPLC法对各工艺产品进行异构体的分离。结果袁明各法生产的肛虹素都合3种异构体，其中B法异构化程度最小。用大白鼠肝匀浆脂质过氧化反应测定各异构体厦各工艺产品中的抗氧化性，发驯Ⅱ。与Ⅸ抗氧化能力相近，Ⅻ。较差。B法产品舍Ⅸ最高，抗氧化性最强，故认为该法为较理想的制备方法，其旋为A3法。关键词壁垒盍墨垫；．苎墨坐些胆红素是人工牛黄的主要原料之一，为体内抗氧化剂。1971年McDonagh等^l发现其工业产品中除天然的胆红素Ⅸ。外，还含有Ⅱ。和Xla异构体。不同的异构体具有不同的生物活性和药理作用，研究不同工艺产品中胆红素异构体的含量和与生物活性的关系，对指导生产、提高胆红素质量和药用价值有重要意义我们根据国内目前的生产实际情况，选择了3种典型的制备方法及钙盐法的不同条件来制备胆红素，用高效液相色谱(HPLC)法测定异构体的含量，并对其与抗氧化性的关系进行了研究，选出=『最佳的生产工艺和条件。l材料与方法1．1材料1．1．1主要原料和试剂猪胆汁由济南窟联厂提供；胆红素标准品系中国药品生物制品检定所产(9001)；硅腔H，化学纯，系青岛海洋化工厂学亿Ir产。1．1．2主要仪器HP109O高效液相色谱仪系美国Hew1ett—Packard产；PE-783红外分光光度计系美国Pe~kin-Elmer产jUV一120-02分光光度计系日本岛津产。．1．1．3动物Wistar大自鼠，体重180~220g，本枝实验动物中心提供1，2方法1．2．1不同工艺胆缸素曲制备按文献25报道曲方法分别用钙盐法(包括盐酸酸化，醋酸酸化、盐酸一醋酸联合酸化)，直接革取法和离子交接法制各1，2，z胆红素含羞测定按文献6的方法进行。1．2，3胆红索异构捧曲薄层色谱(TLC)分离在红光下操作。]，2，3．1胆红素的异构化将胆红素精品溶解于已通过Nt0，5h曲二甲基亚砜中在电磁搅拌下快速滴^10：2(酸：东)的盐酸或：tO：1的冰醋酸，在下继绩搅拌1min或iOmln，将溶液倒八蒸馏水中用氯仿提取，真空于嫖得异构体混台物。维普资讯http://www.cqvip.com336山东医科大学学报30卷4期硅胶H板。将异构化胆红素，用氯仿配成豫度为扭g，阳1溶液，条状点样400I／板，在密闭的色谱缸内吼2冰醋酸氯仿溶液展开2．Sh，将谱带刮下月氯仿冼脱，10块板为一组，洗脱液台并，蒸发氯仿得异构体，置暗处保存。以溴化钾压片作缸外光谱，并与文献报道的3种异构体光谱比较。所得样品供HPLC测定和抗氧化往实验用。1．2．4胆缸素Ⅲ、Ⅸ和xⅢa的反相HPI—C分离测定1．2．41标准曲线的制作精密称取胆红素异构体S．0mg．用已通过Nz0．sh的二甲基亚砜溶于50ml掾色容量瓶中，稀释至刻度，分别吸取该溶液2，4，6，8，j0ml于10mI容量瓶率，用二甲基亚砜稀释至刻度，过滤后进样21．将各异构体的峰面积和含量作图，得标准曲线。确定各异构体的保留时间TLC所分离的异构体为准。1．2．4．2样品的测定精密称取样品胆红素2．Smg，用=甲基亚砜溶解并稀释至S0ml，过滤后进样，罚i得峰面积，根据标准曲线计算每种异构体的百分含量。1．2．5胆红素对脂质过氧化反应的抑制作用1．：．5．1胆红素溶液的配制精密称取胆红素12．0mB，用0．：tmol／L氢氧化钠溶解后移入1oom1棕色容量瓶中，用Tits一马来酸缓冲液(0．~5moI／L，pH．4)稀释至刻度．分别取1．0，2．S．S．0，lGml移入标号为1，2，3．4的10ml容量箍中，用上述缓冲液稀释至度。1．2．5．2肝匀浆的制备大白鼠禁食2,4h后．取肝趾，用0．]5mol／b氯化钾溶液制成10(w／y)的肝匀浆。1．2．5．3胆红素抑制脂质过氧化反应实验取10ml具塞离心管，按表1所示加八各组分，温匀，在37℃水浴串分别保温2．S，10，15，20,3Q4Smin加入i0三氯醋酸4ml终止反应2500f／min离心5min，得匀浆上清液。另取10具塞试营，加八匀浆上清浪和0．67硫代巴比妥酸溶液各2mI，密塞后混匀，置沸水滑中[0min从水浴取出90m...
