制作人：刘康吕胜制作人：刘康吕胜微生物微生物PPTPPT课题制作课题制作1122DNA的变性和复性一）DNA的变性二）DNA的复性三）核酸分子杂交33变性(denaturation)和复性(renaturation)是双链核酸分子的两个重要物理特性。是核酸研究中经常引用的术语。双链DNA、RNA双链区，DNA:RNA杂种双链(hybridduplex)以及其它异源双链核酸分子(heteroduplex)都具有此性质。44一)DNA的变性指DNA分子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。本质：氢键和疏水键断裂部分的或全部的可逆的或非可逆的不涉及到其一级结构的改变55§变性DNA的理化及生物学性质溶液粘度降低溶液旋光性发生改变增色效应或高色效应DNA的增色反应66§破坏双螺旋稳定性的因素⊙加热⊙极端的pH⊙甲醇⊙乙醇⊙尿素⊙甲酰胺77热变性使DNA分子双链解开所需温度(meltingtemperature)很狭的温度范围内突发的跃变过程§熔解温度（Tm）88不同来源DNA间的Tm存在差别的原因（A）DNA的均一性①DNA分子中碱基组成的均一性②待测样品DNA的组成是否均一99(B)DNA的(G+C)含量(G+C)含量越高，即G-C碱基对越多，Tm值越高。Tm与(G+C)含量(X)百分数的关系可用以下经验公式表示(DNA溶于0.2mol/LNaCl中)：X%(G+C)=2.44(Tm—69.3)DNA的Tm值与G-C含量的关系1010离子强度低，Tm值低，融点范围宽离子强度增高，Tm值增高，融点范围变窄DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中，一般保存在1mol/ＬNaCl溶液中较稳定。（C）溶剂的性质1111二)DNA的复性指变性DNA在适当条件下，两条互补链全部或部分恢复到天然双螺旋结构的现象。是变性的一种逆转过程经缓慢冷却即可复性，又称为“退火”1212热变性过程和两种冷却过程示意图1313§影响因素a）温度和时间比Tm低25℃左右的温度是复性的最佳条件越远离此温度，复性速度就越慢复性时温度下降必须缓慢降温时间太短及温差大不利于复性1414b）DNA浓度复性速度与DNA浓度的平方成正比1515c）DNA顺序的复杂性顺序越简单，配对越快。DNA片段愈大，扩散速度愈低，复性越慢。盐浓度越高，复性速度越快。d）DNA分子的大小e）溶液的离子强度1616
