TNF-α对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用VIP免费

麓零攀奈漆熊套秦@wcjd@叫gnet．com基础研究BASTCRESEARCH世界华人消化杂志2007年6月8日；15(16)：1788—1793正lSN1009—3079CN14—1260／RTNF一仪对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用崔巍，刘冬妍，马力，刘沛一背景资料炎症性肠病时肠上皮细胞旁路通透性的增高是其重要的发病基础，TNF一Ⅱ可能发挥重要作用．目前体内、体外的多项研究已经证实，TNF—a可以增加肠上皮细胞旁路的通透性．但具体作用机制还不十分清楚．肠上皮细胞旁路通透性主要受紧密连接调控．而紧密连接由多种紧密连接蛋白组成．claudin一1是最重要的一种紧密连接蛋白，其表达量的高低直接影响肠上皮细胞屏障的跨上皮细胞电阻．那么TNF一Ⅱ增加肠上皮细胞旁路的通透性是否是由于破坏紧密连接蛋白claudin．1而造成的呢?本文就这一问题研究了TNF一0L对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin．I表达的影响．崔巍，刘沛，中国医科大学附属第一医院消化内科辽宁省沈阳市110001刘冬妍，马力．中国医科大学盛京医院感染科实验室辽宁省沈阳市110001崔巍，在读博士生讲师．中国医科大学附属第一医院消化内科，主要从事肝脏病的临床和科研工作国家自然科学基金资助项目，No．30670947通讯作者：刘沛，110001，辽宁省沈阳市南京街155号，中国医科大学附属第一医院消化内科．s训upei2003@yahoo．com．cn电话：024—83956962传真：024—83956451收稿日期：2007—02—25接受日期：2007—03—31EffbctoftumornecrosisfaCtor_仅onproteinexpressionoftightjunctionproteinininteStjnaIepithelialCe¨SWeiCu．，Dong二丫anLiu，LiMa，PeiLiuW色iCui，PeiL．u，Depar七mentofDigestivediseases，theFirstAffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversitv。Sheny锄嚷11000l，LiaoningProvince，C1linaD0ng_YanUu，L．Ma，Depar咖entofIIlfectiousDiseases，吐leSecondA伍IiatedHospitalofChinaMedicalUnivers盹Shenyangl10001，LiaoningPmvince，ChinaSuDpOrted—byNationalNatllralScienceFoundationof(mill乱No．97100252COrrespondencet0：PeiLiu，DepanIllentofDigestiveDiseases，theFirstA伍liatedHospitalofChinaMedicalUnivers峨155NanjingNonhStreet，Shenyang11000l，LiaoningPro们nce，Chilla．syliupei2003@vahoo．com．cnReOeived：2007．02．25AOceDted：2007一03—31AbstraCtAlM：Toexplorethemechanismofintestinalepithelialbarrierdisruptioninducedbytumornecrosisfactoralpha(TNF—d)．Wedetectedtheexpressionofmetightjunctionproteinclaudin一1inCaco一2ceUswithTNF一Ⅸtreatment．METHODS：Caco一2cellsbetweenpassages20and30wereculturedwithDMEMincludm220％fetalbovineserumand2mmol／L2lutaminefor7davs．CellswerethentreatedwithdifferentconcentrationsofTNF一Ⅸ(0，10，and100pg／L)for24hourswhenthevbecamefused。ProteinwasextractedfromceⅡstoprepareNP一40de—tergent—s01ubleandins01ubleproteinfractions．WesternblotwasusedtomeasuretheDroteinIeVelsofphosphorylatedandunphosphoryIatedclaudin一1．IndirectirnmunofluorescencewasaD—pliedtothe10calizationofclaudin一1．Real一timequantityp01ymerase—chainreaction(RQ—PcR)wasusedtodetectthemRNAexPressionofclaudin一1．RESUL．TS：Immunofluorescenceshowedthatclaudin一1wasdis仃ibutedaroundthecellmem—braneandpresentedscrobiculatelinearfluo—rescence．A10“g／LconcentrationofTNF—acausedweakenednuorescencesi霉州sthatwereabnormallvdistributeddentatelv．Claudin一1hastwomolecularforms：oneisthenonphos—phorylatedform(20kDalthatprimarilvexistsinNP_40solubleproteills；theotheristhephos—phorylatedform(25kDa)thatonlvexistsinNP—40insolubleproteins．TNF—OLdidnotaffecttheproteinexpressionof65-kDaclaudin-1butdecreased80一kDaclaudin一1proteinexpressioninaconcen缸ation—dependantmannercomparedwiththeconhol(10，100“g／L：0．31土0．02，0．24±0．05口s0．43±0．09，P>0．05，P<0．05)．Rea...