实时荧光定量RT-PCR法检测膀胱移行VIP免费

·论著·实时荧光定量RT-PCR法检测膀胱移行细胞癌VEGF的表达和意义安全意1,张金刚2,刘德斌3,李成4,马可为5,姜丽萍6【摘要】目的建立实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应(real-timequantitative,RT-PCR)检测膀胱移行细胞癌(BTCC)组织VEGFmRNA表达的方法,并验证其与免疫组织化学检测VEGF蛋白表达的相关性。方法采用免疫组织化学SP法和实时荧光定量RT-PCR法分别从蛋白水平和mRNA水平检测了31例BTCC和15例正常膀胱黏膜组织中VEGF的表达。结果BTCC中VEGFmRNA表达水平显著高于正常组,两组比较差异有显著性(P<0.05);BTCC中表达水平在高分化组与中低分化组之间、Tis-T1期与T2-T4期间的差异均有显著性(P<0.05)。VEGF的阳性表达率在BTCC组中为100%,显著高于正常组(P<0.05),在高分化组与中低分化组之间、Tis-T1期与T2-T4期间的差异均有显著性(P<0.05)。结论本研究所建立的用于检测人BTCC组织VEGFmRNA表达的实时荧光定量RT-PCR方法,是一种快速有效、灵敏度高、特异性好的定量检测方法,与免疫组化SP方法检测的VEGF蛋白表达具有良好相关性,可作为研究膀胱肿瘤的生物学行为和判断预后的参考指标。【关键词】膀胱癌;血管内皮生长因子;免疫组织化学;实时荧光定量RT-PCR【中图分类号】R737.14【文献标识码】A【文章编号】1606-8106(2009)02-0081-05DetectionofVEGFmRNAinbladdertransitionalcellcarcinomabyreal-timefluorescencequantitativeRT-PCRANQuan-yi,ZHANGJin-gang,LIUDe-bin,etal.ThePoliceGroupofDalateQi,Neimenggu014300,China【Abstract】ObjectiveToestablishareal-timefluorescencequantitativeRT-PCRfordetectionofVEGFmRNAexpressioninbladdertransitionalcellcarcinoma(BTCC)andverifythecorrelationwithproteinexpressiondetectedbytheimmunohisochemistrymethod.MethodsTotalRNAwasextractedwithTrizolfromthetissuesandmRNAwastranscribedreverselyintocDNA.Thereal-timequan-titativeRT-PCRwasusedtodetecttheex2pressionofVEGFmRNAin31inBTCCand15controlnormalbladdermucosatissues.TheimmunohistochemistrySPmethodwasusedtoevaluatetheproteinexpressionofVEGF.ResultsTheexpressionofVEGFmRNAwassig2nificantlyhigherinBTCCtissuesthanthatinthenormalbladdermucosatissuetissues(P<0.05).BTCCexpres2sionlevelsinwell-differentiatedgroupandbetweengroupsofpoorlydifferentiated,Tis-T1withT2-T4perioddifferenceswerestatisticallysignificant(P<0.05).ConclusionReal-timefluorescencequantitativeRT-PCRusedtodetecttheexpressionofVEGFmRNAmightbeareliablemethodforearlydiagnosisofBTCC.Theexpres2sionofVEGFmRNAiscorrelatedwiththatoftheVEGFproteinsignificantly.Itcanbeusedtostudythebiologicalbehaviorofbladdercancerandjudgtheprognosis.作者单位:1014300内蒙古鄂尔多斯,鄂尔多斯市达拉特旗公安局刑警大队2017000内蒙古鄂尔多斯,鄂尔多斯市东胜区公安局刑警大队3010011内蒙古呼和浩特,内蒙古自治区人民检察院技术处4100112内蒙古呼和浩特,内蒙古武警总队医院5010015内蒙古呼和浩特,内蒙古自治区医院6010059内蒙古呼和浩特,内蒙古医学院基础医学院(通讯作者)·18·中华中西医杂志ChineseJournalofTraditional&WesternMedicine2009年第10卷第2期【Keywords】bladdercancer;vascularendothelialgrowthfactor;immunohistochemistry;real-timefluorescencequantitativeRT-PCR膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,其中膀胱移行细胞癌(bladdertransi-tionalcellcarcino2ma,BTCC)占90%以上,且复发率极高,复发后肿瘤恶性度可增高、浸润、转移等行为有增强趋势。此过程与肿瘤细胞外基质的降解、新生血管的大量形成有密切关系。血管内皮生长因子(vascularendothe2lialgrowthfactor,VEGF)是血管内皮细胞的特异性有丝分裂原,能促使肿瘤的血管生成、血管内物质外渗、为肿瘤细胞血管生长和迁移提供基质。在肿瘤发生发展过程中起重要作用。血管内皮生长因子(VEGF)是调节肿瘤血管生成的重要因子,具有促进血管内皮细胞有丝分裂,增强血管通透性,促进内皮细胞增殖并延缓其凋亡等...