猪笼草消化液中蛋白酶的活性初探_唐历波VIP免费

基因组学与应用生物学，2010年，第29卷，第2期，第293-297页GenomicsandAppliedBiology,2010,Vol.29,No.2,293-297研究报告ALetter猪笼草消化液中蛋白酶的活性初探唐历波*姬可平王燕陈锦永遵义医学院珠海校区生化教研室,珠海,519041*通讯作者,tanglibo111@yahoo.com.cn摘要为了进一步分析猪笼草瓶状体内消化液中蛋白质的性质，本研究在不同的温度和pH条件下测定消化液中蛋白酶的活性，并且比较了3种不同沉淀方法对消化液蛋白进行的浓缩，通过SDS-聚丙烯酰胺电泳对消化液蛋白作了初步分离。结果表明，猪笼草消化液中蛋白酶的最适酶活温度为50℃，且稳定性最高；当pH为5时，该蛋白酶活性出现峰值，采用氯仿-正丁醇法(5:1)沉淀浓缩猪笼草消化液蛋白样品效果最佳。聚丙烯酰胺电泳结果表明，消化液至少包括三种蛋白组分，分子量分别为24.3kD、35.1kD和61.4kD，且35.1kD条带具有抗胰蛋白酶消化活性。本研究为综合开发利用猪笼草野生资源提供理论依据。关键词猪笼草,蛋白酶活性,温度,pH,SDS-PAGEPreliminaryStudyontheActivitiesofProteaseinDigestiveJuiceofPitcherPlantTangLibo*JiKepingWangYanChenJingyongDepartmentofBiochemistryZhuhaiCampusZunyiMedicalCollege,Zhuhai,519041*Correspondingauthor,tanglibo111@yahoo.com.cnDOI:10.3969/gab.029.000293AbstractInordertoanalyzethecharacteroftheproteinofthedigestivejuiceintheascidiumofpitcherplant,wecarriedoutastudyofeffectindifferenttemperatureandpHonactivityofproteaseindigestivejuiceofpitcherplantwealsocompared3kindsofprecipitationmethodsofproteaseconcentrateandisolatedproteinsampleindigestivejuicebyusingSDS-PAGE.Theresultsshowedthattheoptimumtemperatureofproteaseindigestivejuiceintheas-cidiumwas50℃withthemaxlmumstability,andthepeakvalueofactivityofproteasewasfoundwiththepH5.Ex-perimentalresultsindicatedthebestmethodoftheproteinconcentratewaschloroform/butanol(5:1),andtherewereatleastthreekindsofproteincomponentwithdifferentMW,i.e.24.3kD,35.1kDand61.4kD,respectively,itwasalsoshownthattheproteinwith35.1kDhasthecharacterofantitrypsine.Thisresearchshouldsupplysomeevi-dencesfortheexploitationandutilizationreasonableinwildresourceofpitcherplant.KeywordsPitcherplant(Nepenthesmirabilis),Activityofprotease,Temperature,pH,SDS-PAGEwww.genoapplbiol.org/doi/10.3969/gab.029.000293基金项目：本研究由遵义医学院校区启动基金(KY200603)资助猪笼草为猪笼草科(Nepenthaceae)猪笼草属(Ne－penthes)，中国野生猪笼草(Nepenthesmitabilis(lour.)Druce)只有一个种(陈焕镛,1965)，分布在广东西南部、香港及海南岛的丘陵灌丛中或酸性沼泽边缘(徐迟默,2003)。猪笼草是热带食虫植物的代表种(杨光穗等,2006)，由于生长在比较贫瘠的土壤中，而且根系很不发达，所以很难获得足够的养料，为了适应环境生存下去，在长期的自然选择和遗传变异中，叶子慢慢变化演变成奇妙的“捕虫器”，即食虫囊。猪笼草通过这种特殊的变态叶将昆虫或其他小型动物捕获，并通过变态叶的消化腺分泌消化液将其消化从中获得营养，特别是获得硝酸盐来补充光合作用。而对于猪笼草变态叶的解剖特点，吴钿和叶昌辉(2000)研究认为瓶状体是由叶卷须膨大形成，在瓶状体内基因组学与应用生物学GenomicsandAppliedBiologywww.genoapplbiol.orgDOI:10.3969/gab.029.000293部下缘，密生燕窝状腺体，能分泌酸性消化液。对猪笼草瓶状体内消化液的研究，还没有相关的报道，我们前期预试验表明，猪笼草未打开瓶盖的囊中消化液中含有蛋白质成分。本研究通过比较不同的沉淀浓缩分离蛋白的方法，对消化液蛋白质性质做初步鉴定，为猪笼草的开发应用提供理论依据。1结果与分析1.1瓶状体内消化液总蛋白含量测定通过线性拟合得牛血清白蛋白(BSA)的量(mg)与吸光度A的关系式为：y=0.205x+0.0431(式中y为牛血清白蛋白的量(mg/mL)，x为吸光度)。式中的BSA浓度相关系数为0.9959，BSA蛋白含量标准曲线如图1所示。按3.3测...