课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数学科生物编号006编制审核批准时间2009-2-23【学习目标】1.研究培养基对微生物的选择作用2.进行微生物数量的测定3.分析研究思路的形成过程，找出共性和差异性【重点难点】课题重点：对土样的选取和选择培养基的配制课题难点:对分解尿素的细菌的计数【知识链接】1．培养基一般都含有、、、四类营养物质，另外还需要满足微生物生长对、以及的要求。2.培养基的分类：按照物理性质可以分为、、；按照化学性质分为和；按照用途分为和。3.尿素可以为农作物提供肥，但是只有被分解成之后，才能被植物吸收利用。4．以土壤中能分解尿素的细菌为研究对象，要达到的两个主要目的是：⑴；⑵。5．PCR（）是一种在体外将。此项技术的自动化，但是在合成的过程中需要在93℃的条件下，所以要求使用耐高温的【导学过程】（一）筛选菌株1.原理:人为提供有利于生长的条件（包括等），同时抑制或阻止其他微生物生长。2.方法：选择培养基定义：在微生物学中，将允许的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。配制的的依据：①在培养基中加入某种化学物质可以做到这一点，加入可以分离出酵母菌和霉菌。加入高浓度的食盐可得到。这里的加入是在培养的培养成分的基础上加入的。②培养基中的营养成分的改变也可达到分离微生物的目的。如培养基中缺乏源时，可以分离固氮微生物。③当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。④改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目的，如将培养基放在环境用心爱心专心高二年级导学案中培养只能得到耐高温的微生物。讨论1：怎样找耐高温的酶呢？讨论2.如何找到能够分解石油的细菌？(二)统计菌落数目（1）测定微生物数量的常用方法有和。（2）稀释涂布平板法统计样品中活菌的数目的原理当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活细菌。为了保证结果准确，一般设置个平板，选择菌落数在的平板进行计数，并取。统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，因此，统计结果一般用菌落数而不是活菌数来表示。讨论3.完成课本P22页思考题讨论4.完成课本P22页旁栏思考题？（三）设置对照设置对照的主要目的对照试验的定义：讨论5.完成课本P23页A同学的两个对照试验？（四）实验设计实验设计包括，所需、、用具和药品，具体的以及时间安排等的综合考虑和安排。（1）土壤取样从富含有机物、潮湿、pH≈的土壤中取样。铲去，在距地表约cm的土壤层取样。（2）制备培养基准备牛肉膏蛋白胨培养基和用作为氮源的选择培养基。牛肉膏蛋白胨培养基作为，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。（3）微生物的培养与观察将土样以1、101、102……依次等比稀释至107稀释度，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，（是否）更换移液管。对于不同的微生物要选择不同的稀释浓度，测定细菌一般用心爱心专心选择，测定真菌一般选择，测定放线菌一般选择。注明培养基种类、培养日期以及平板培养样品的稀释度。将涂布好的培养皿放在℃温度下培养随着培养时间的延长，会有不同的菌产生。比较牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。讨论6.为什么分离不同的微生物需要不同的稀释浓度？（4）细菌的计数当菌落数目稳定时，进行计数，防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。求出平均值，根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。（五）操作提示1.本实验中要注意那些无菌操作？2.在进行多组实验过程中，应注意做好标记，其目的是什么？应标记哪些内容？怎样操作更有利于实验的进行？3.如何对分离的菌种作进一步的鉴定？【达标检测】1．自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是()A、碳源B、氮源C、无机盐D、生长因子2．发酵工程的第一个重要工作是选择优良的单一纯种。消灭杂菌，获得纯种的方法不包括（）A．根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基B．根据微生物缺乏生长因子的种类，在培养基中增减不同的生长因子C．根据微生物遗传组成的差异，在培养基中加入不同...
