实验八酶促反应的影响因素一、目的要求1．了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。2．学习检定温度、pH、激活剂、抑制剂影响酶促反应速度的方法。二、实验原理在酶促反应中，酶的催化活性与环境温度、pH有密切关系，通常各种酶只有在一定的温度、pH范围内才表现它的活性，一种酶表现其活性最高时的温度、pH值称为该酶的最适温度、最适pH。在酶促反应中，酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活性，如氯化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而硫酸铜则是它的抑制剂。本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活性的影响。淀粉（遇碘呈蓝色）→紫色糊精(遇碘呈紫色)→红色糊精(遇碘呈红色)→无色糊精(遇碘不呈色)→麦芽糖(遇碘不呈色)→葡萄糖(遇碘不呈色)。所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断以此反映淀粉酶的活性，由此检定温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。三、实验器材试管和试管架、恒温水浴、冰浴、吸量管（1mL6支、2mL4支、5mL4支）、滴管、量筒、玻棒、白瓷板、秒表、烧杯、棕色瓶。四、实验试剂1．新鲜唾液稀释液(唾液淀粉酶液)：每位同学进实验室自己制备，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，0.5min后使其流入量筒并稀释至200倍(稀释倍数可因人而异)混匀备用。2．1%淀粉溶液A(含0.3%NaCl)：将1g可溶性淀粉及0.3g氯化钠混悬于5mL蒸馏水中，搅动后，缓慢倒入沸腾的60mL蒸馏水中，搅动煮沸1min，冷却至室温，加水至100mL,置冰箱中保存。3．1%淀粉溶液B(不含NaCl)4．碘液：称取2g碘化钾溶于5mL蒸馏水中，再加入1g碘，待碘完全溶解后，加蒸馏水295mL，混匀贮于棕色瓶中。5．1%NaCl溶液6．1%CuSO4溶液7．缓冲溶液系统按下表混合配制。五、操作步骤1．温度对酶促反应的影响取3支试管编号，按下表进行操作：试管号淀粉酶液体积/mL酶液处理温度/℃，5minpH6.8缓冲溶液体积/mL1%淀粉溶液A体积/mL反应温度/℃，10min观察结果pH0.2mol/L磷酸氢二钠溶液体积/mL0.1mol/L柠檬酸溶液体积/mL5.05.86.88.05.156.057.729.724.853.952.280.28123111037～4070左右222111037～4070左右上述各管在不同的温度下保温反应10min后，立即取出，流水冷却3min，向各管分别加入碘液1滴。仔细观察各试管溶液的颜色并记录，说明温度对酶活性的影响，确定最适温度。2．pH对酶促反应的影响取1支试管,加入1%淀粉溶液(A)2mL、pH6.8缓冲溶液3mL、淀粉酶液2mL，摇匀后，向试管内插入一支玻棒,置37℃水浴保温。每隔1min用玻棒从试管中取出1滴混合液于白瓷板上，随即加入碘液1滴，检查淀粉水解程度。待混合液遇碘不变色时，从水浴中取出试管，立即加入碘液1滴，摇匀后，观察溶液的颜色，再次确认水解程度。记录从加入酶液到加入碘液的时间，此时间称为保温时间。若保温时间太短（2～3min），说明酶液活力太高，应酌情稀释酶液；若保温时间太长（15min以上），说明酶液活力太低，应酌情减少稀释倍数，保温时间最好在8～15min。然后进行如下操作：取4支试管编号，按下表操作：试管号缓冲溶液体积/mL1%淀粉溶液A体积/mL淀粉酶液体积/mL（每隔1min逐管加入）观察结果pH5.0pH5.8pH6.8pH8.01234300003000030000322222222将上述各管溶液混匀后，再以1min间隔依次将4支试管置于37℃水浴中保温。达保温时间后，依次将各管迅速取出，并立即加入碘液1滴。观察各试管溶液的颜色并记录。分析pH对酶促反应的影响，确定最适pH。3．激活剂、抑制剂对酶促反应的影响取3支试管编号，按下表加入各试剂（体积单位：mL）：试管号1%淀粉溶液B1%NaCl溶液1%CuSO4溶液蒸馏水淀粉酶液观察结果123222100010001111将上述各管溶液混匀后，向1号试管内插入一支玻棒，3支试管同置于37℃水浴保温1min左右，用玻棒从1号试管中取出1滴混合液，检查淀粉水解程度(方法同步骤2)。待混合液遇碘液不变色时，从水浴中迅速取出3支试管，各加碘液1滴。摇匀观察各试管溶液的颜色并记录，分析酶的激活和抑制情况。六、注意事项1．加入酶液后，要充分摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，得到理想的颜色梯度变化。2．用玻...
