实验一卷心菜中过氧化物酶热稳定性的初步研究一、实验原理果蔬中的过氧化物酶（peroxidase）往往具有较高的热稳定性，对果蔬进行热烫处理时，常以过氧化物酶是否失活作为热烫是否充分的标准
许多研究表明果蔬中的过氧化物酶有热稳定和热不稳定两部分
这两部分的比例取决于果蔬的品种和热烫处理的温度
过氧化物酶催化的典型反应为：H2O2＋AH2→A＋2H2O
AH2是无色的还原性化合物，如果它经过氧化转变成有色的A，那么反应体系在特定波长下的吸光值就会随反应进行而增加
因此，可以用分光光度法测定过氧化物酶的活力
二、试剂和仪器试剂：0
05mol/L磷酸盐缓冲液pH7
0mol/LNaCl(缓冲液Ⅰ)、0
1mol/L磷酸盐缓冲液pH7
0(缓冲液Ⅱ)、1%邻苯二胺-乙醇溶液、0
3%过氧化氢溶液仪器：组织捣碎机、抽滤装置、水浴锅、721分光光度计（含比色皿）、秒表、常规玻璃仪器三、实验步骤1、从卷心菜中提取过氧化物酶125g卷心菜＋125mL缓冲液Ⅰ↓均质（20000rpm，2min）匀浆↓抽滤液体↓离心（8000rpm，15min，4℃）↓¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯↓残渣滤过液（粗酶液）2、过氧化物酶热处理将从卷心菜中萃取得到的过氧化物酶粗酶液置于试管中
取适量酶液稀释5倍左右，过滤后测定酶活
另取适量酶液分别置于已编号的试管中，将试管在60℃水浴中保温1min，然后移至85℃水浴锅中，分别处理0
5min、1min、1
5min、2min、3min、5min、7min和10min，然后立即将试管转移至冰浴中，快速冷却至0℃
再取适量酶液分别置于已编号的试管中，并将试管在60℃水浴中保温1min，然后在100℃下分别处理15s、30s、45s、1min、1
5min、2min和3min，然后在冰浴中快速冷却，测定残余过氧化物酶活力
3、过氧化物酶活力测定如果热处
