高中生物 4.2 分子生物学技术规范训练 苏教版选修1VIP免费

第二节分子生物学技术(时间：30分钟满分：50分)考查知识点及角度难度及题号基础中档稍难PCR技术的原理2、4PCR技术的过程1、35PCR技术的应用678一、选择题(共5小题，每小题4分，共20分)1．下列有关PCR技术的叙述，不正确的是()。A．PCR技术经过变性、退火、延伸3个阶段B．PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等C．PCR技术需在体内进行D．PCR技术利用碱基互补配对的原则解析PCR一般要经历30多次循环，每次循环可以分为变性、退火和延伸三步。PCR技术可用于基因诊断，判断亲缘关系等。PCR技术是在体外进行的。答案C2．PCR技术是现代分子生物学实验工作的基本方法之一，区别于细胞内DNA复制，它利用的原理是()。A．DNA的半保留复制B．碱基互补配对C．转录和翻译D．DNA热变性原理解析在80～100℃的温度范围内，DNA的双螺旋结构将解旋，双链分开，这个过程称为变性。当温度缓慢降低后，两条彼此分离的DNA链又会重新结合成双链。PCR利用了DNA的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚和结合。答案D3．标准的PCR过程一般分为变性、退火、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是()。A．94℃、56℃、72℃B．72℃、56℃、94℃C．56℃、94℃、72℃D．80℃、56℃、72℃解析当温度上升到90℃(90～96℃)以上时，双链DNA解聚为单链，称之为变性；当温度下降到50℃(40～60℃)左右时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合；当温度上升到72℃(70～75℃)时，溶液中的四种脱氧核苷酸在Taq聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链，称为延伸。答案A4．变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，但共价键并未断裂。引起变性的因素很多，升高温度、过酸、过碱、纯水以及加入变性剂等都能造成核酸变性。PCR的反应过程中，引起变性的因素是()。A．pH过高B．pH过低C．升高温度D．加入酒精解析各选项的条件均能导致DNA分子变性，但在PCR反应中，变性后还要进行退火和延伸等过程，过酸、过碱、酒精等能够导致反应过程中的酶变性失活，使DNA扩增不能进行，因此，在PCR反应中，选用升高温度使DNA变性。答案C5．下列关于PCR引物的说法中，不正确的是()。A．引物是PCR过程中与模板DNA部分序列互补，并能引导模板DNA的互补链合成的脱氧核苷酸序列B．引物常根据需要扩增的目标DNA的碱基序列用化学合成的方法获得C．DNA聚合酶只能使DNA链从引物的3′端开始向引物的5′端延伸D．引物的3′—端必须具有游离的OH基团解析在DNA分子扩增时，DNA聚合酶不能从头开始合成DNA，只有从3′端延伸DNA链，因此需要引物。当引物与DNA母链结合后，DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA了。答案C二、非选择题(共30分)6．(8分)PCR技术是一种DNA体外扩增技术。1988年，PCR仪问世，并被广泛应用于基因扩增和DNA序列测定。右图所示是PCR技术示意图。请回答下列问题。(1)引物是此过程中必须加入的物质，从化学本质上说，引物是一小段________。(2)将双链DNA________，使之变性，从而导致________。(3)引物延伸需提供________作为原料。解析(1)引物是一小段单链DNA或RNA。(2)DNA变性的温度是94℃，使双链DNA分离成两条单链。(3)DNA扩增的原料是四种脱氧核苷酸。答案(1)单链DNA或RNA(2)加热到94℃双链DNA分离成两条单链(3)四种脱氧核苷酸7．(11分)用基因工程技术从经过分离、提纯的圆褐固氮菌中获取固氮基因，然后进行PCR扩增。下列表1和表2分别表示用PCR扩增固氮基因的反应体系及反应条件。PCR反应体系的配方缓冲液5μL脱氧核苷酸1μL引物A0.5μL引物B0.5μLDNA聚合酶0.5U模板DNA1～2μL加去离子水至50μL表1反应条件温度时间变性95℃30s退火55℃30s延伸72℃1min30次循环后适宜5～10min保温4℃2h表2(1)请指出DNA分子在体内复制所需的条件是：________、________、________和________。PCR反应中，95℃条件下变性30s的目的是：________。(2)假设一个模板DNA分子中有800个碱基对，其中含有腺嘌呤600个，若通过PCR技术共消耗周围环境中游离的胞嘧啶脱氧核苷酸6200个，则该模板DNA在PCR扩增仪中已经复制了________次。(3)请指出PCR技术与转录过程的三个不同之处：____________________________________________________...