利用小随体多重PCR和带型分析鉴别酿酒酵母菌株VIP免费

第一学习小组 段志峰 朱江 邢英超刁文涛 冯延宾 张熠唐亦辰 黄云 何骁男利用微卫星多重 PCR 和带型分析鉴别酿酒酵母菌株摘要我们提出了一种利用多重 PCR 对微卫星位点多态性分析快速鉴别酿酒酵母菌种的方法。无需使用苯酚，简单提取 DNA，利用多重 PCR 扩增 SC8132X, YOR267C 和 SCPTSY7 位点，用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳进行带型分析，这种方法可使我们区分 30 种商用葡萄酒酿酒菌种。该方法被成功应用于一项在 15 和 20 摄氏度这两个发酵温度下检验两个菌株间的显性关系的生态学研究中。这种方法在酿酒和酵母生产工业中常规的低成本检测酵母菌株的过程中应该有应用价值。关键词：微卫星，PCR，酵母菌株，葡萄酒，发酵1.前言使用选育出的用于酒精发酵的酵母菌株酿造葡萄酒是现在普遍使用的一种方法。酵母对葡萄酒的质量尤其是口味有很大的影响（现代的酿酒学家发现用不同的酵母菌株发酵可以使葡萄酒产生不同的特点。这导致了具有多种特色并可以应用于不同领域的选育菌株工业生产化。现在市场上提供了几百种葡萄酒菌种，它们几乎都属于酿酒酵母菌属。与此同时，人们对发明快速而且精确检测酵母菌株的方法也产生了兴趣。在葡萄酒酿造中，它的应用包括确定接种菌株对在未发酵葡萄汁中野生菌株的显性优势，实时记录发酵中的菌株动态过程，控制菌株生产的质量并鉴别无效菌株。酿酒时，选育出的菌株被接种于富含野生酿酒酵母和非酿酒酵母的葡萄汁中。快速鉴别酵母菌株的方法应该考虑到菌群生长动态的观察，选育菌株的显性优势和环境因素对酵母菌株的影响。在葡萄酒发酵，温度是影响酵母动力学的一个主要因素（Fleet and Heard,1993）;生态研究也显示出了酿酒酵母菌株的不同行为。(Epifanio et al., 1999; Torijaet al., 2003).事实上，酿酒商要求菌株的一个突出特点是能够在特定的温度下进行良好的发酵反应。很多时候，在一个典型的发酵白葡萄，发酵温度应保持 18 摄氏度，但达到 12-15 摄氏度也不少见，从而提高调味品酯的含量并减少高酒精形成。在此温度下，经常会发生发酵停滞，因此，在这种状况下，选育菌种的低温代谢能力和对野生菌种的显性优势备受重视。 在过去的几年中，研究侧重于用分子生物学方法进行菌株分化（ Beh et al., 2006） ，如染色体分析法（Carle and Olson,1985; Blondin and Vezinhet, 1988）和限制性片段长度多态性（ RFLP ）分析 mDNA （Querolet al., 1992） ，...