生物样品常规制样技术超薄切片技术负染色技术扫描样品制作技术透射电镜特殊制样技术冷冻蚀刻技术电镜细胞化学技术免疫电镜技术 X 射线微区分析技术第四章 透射电镜生物样品 制备技术第一节 载网和支持膜第二节 超薄切片的制作第三节 负染色技术第一节 载网和支持膜一、载网：用于承载样品的 ( 直径为 3mm) 网状材料。1. 载网的类型及选择：非金属网：载网金属网铜网：惰性网：70 ％的透过率2. 载网的清洗：酸碱法或有机溶剂、蒸馏水等洗净干燥。X 射线元素分析常规超薄切片 (200 目以上 )细胞化学二、样品支持膜为了增强样品的强度，在载网表面先覆一层薄膜。1. 对膜的要求：本身没有结构，薄而透明，电子束易通过；有足够的机械强度，经得住电子束的轰击；不与样品发生化学反应。厚度在 10 ～ 15nm2. 常用支持膜及其制备福尔莫瓦膜（ Formvar):化学名称：聚乙烯醇缩甲醛 .特点：机械强度高，制作简便 .制作： 0.2 ～ 0.5 ％的氯仿溶液，玻璃片汆出 , 水面剥离法。火棉胶膜： 1~2% 醋酸戊脂溶液，平皿沉淀法。碳膜：稳定性好，高分辨制样。操作方法0.2~0.5% 的氯仿溶液蒸馏水膜1. 福尔莫瓦支持膜的制作方法2. 火棉胶膜用平皿水面展开法：平皿中盛有双蒸馏水，滴两滴 1~3% 的火棉胶膜液，待片刻溶剂挥发后，在膜上摆放洁净的铜网，滤纸捞起。3. 碳膜制作：用真空喷镀法制膜。第二节 超薄切片的制作超薄切片：是指厚度小于 100 (50~70) 纳米的切片。要求：厚薄均匀、厚度符合标准； 无皱褶刀痕、震颤和沉淀； 细胞结构保存良好，具有良好的电子反差； 具有一定程度的机械强度。制作流程：包括六大步， 40 多次操作取材→固定→脱水→包埋→切片→染色→ 镜检超薄切片制作流程图0~4℃室温23237~60℃染色观察聚合修块切片捞片取材固定漂洗50%70%80%包埋90%95%100%过渡浸透一、取材 从动、植物机体上或细胞及微生物培养物中获取所需要的研究材料的操作过程。1. 取材的原则要求：准、快、小、冷、轻五字原则。•准确：根据研究目的确定取材部位，取到典型部位。•快速：材料离体后应在 1 分钟内投入固定液。•体积小：固定液渗透力所限，样品体积为 1mm³ 或 1×3mm 长条。•低温：固定液及器材需预冷 (0~4 ℃) ，以降低自溶酶的活性。•防损伤：器械要锋利，切割轻巧，防挤压、牵拉损伤 组织细胞的内部结构。取材 ↓固定 ↓脱水 ↓包埋 ↓切片 ↓染色 ↓镜检2. 取材方法...
