北京理工大学珠海学院 2016 级本科生毕业设计 穿山甲鳞片荧光 PCR 鉴定方法研究 北京理工大学珠海学院 2016 级本科生毕业设计穿山甲鳞片荧光 PCR 鉴定方法研究摘要穿山甲作为全球非法贸易最严重的物种，正逐渐走向灭绝。因相传穿山甲鳞片可治疗许多病症，人们趋之若鹜地大量捕杀穿山甲，市场流通着大量非法贸易的穿山甲鳞片。本实验采用与传统鉴定穿山甲方法相比，鉴定效果更加精确、鉴定速度更加快的荧光定量PCR 技术对穿山甲鳞片进行定性测定。本次试验共有 6 组穿山甲的 DNA 样品作为实验对象，并设置6 组非特异性样品作为对照组，并将中华穿山甲质粒进行梯度稀释，选取其中浓度为 104为阳性。不同于传统的形态学观察穿山甲鳞片、色谱仪检测与普通 PCR 等方法，荧光 PCR 具有更高的灵敏度、特异性，其快速、高效的特点为结果带来更加可靠的后盾。本次实验进行了 4 大组的实验，对实验室样品检测、特异性检测、灵敏度检测与重复性的测定。每一组都将会设置平行试验。实验结果相对良好，样品全部出现扩增曲线；非特异性的哺乳动物样品、阴性对照则全无扩增曲线出现；灵敏度测试试验中，荧光 PCR 能捕捉到稀释倍数为 10-8的DNA，是普通 PCR 灵敏度的两倍；重复性中根据 CT 值计算其标准差与变异系数，结果都在 5%以内，具有相对较稳定的扩增。试验说明，荧光 PCR 对穿山甲鳞片与其 DNA 的测定有相对可观的优势。关键词：引物设计；DNA 提取；Real-time 荧光定量 PCR；穿山甲鳞片北京理工大学珠海学院 2016 级本科生毕业设计Study on the identification of pangolin scales by fluorescent PCR.AbstractAs the most serious species in the world, pangolin is becoming extinct. Because it is said that pangolin scales can cure many diseases, people are flocking to kill a large number of pangolins, and a large number of illegally traded pangolin scales are circulating in the market.In this experiment, compared with the traditional method of identification of pangolin, the identification effect is more accurate and the identification speed is faster. In this experiment, six groups of DNA samples of pangolin were used as the experimental objects, and six gr...
