引物纯化方式HAP、PAGE、DHLPC的区别VIP免费

精品文档。1欢迎下载引物纯化方式HAP、PAGE、DHLPC等的区别纯化方式：一 OPC纯化 OPC纯化是使用一种叫Cartridge的反向层析柱 （美国 Waters 公司生产 ),根据 DNA保护基 (DMTr 基) 和层析柱中树脂间的亲和力作用的原理进行纯化目的DNA片段。OPC法纯化的DNA纯度大于 90%，适用于 PCR用引物， DNA测序用引物，各种探针等。此级别对短链较为有效。具体操作方法如下。1. DNA 合成是用全自动 DNA 合成仪从 3 ‘→ 5 ‘进行人工合成的。在刚合成完的 DNA 的5‘端的碱基上带有一个大型的疏水性保护基团 DMTr 基，而中间产物的短链杂质 DNA 中不具有 DMTr 基。利用这一性质进行目的 DNA 的纯化。2. 把粗样 DNA 加入 Sep-Pak Cartridge 柱上（简易反相柱 ) 。此时， 所有的合成产物全吸附于反相柱上。3. 用甲醇清洗反相柱。此时，吸附能力强的带有 DMTr 保护基的目的 DNA 仍吸附于反相柱上，而短链杂质 DNA 片段全部被冲走。4. 向反相柱上加入强酸 TFA (Trifluoroacetic acid) , 切断 DMTr 保护基和目的 DNA 之间的连接。5. 再用乙腈洗脱目的 DNA 。此时回收出来的目的 DNA 的纯度能达到 95% 以上 。可用于DNA 测序等。二 PAGE纯化 PAGE纯化法是使用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，对 DNA片段进行分离， 然后从凝胶中回收目的 DNA的方法。 PAGE纯化法也是一种非常有效的DNA纯化方法，纯化后的纯度大于95%，对长链 Oligo DNA 的纯化特别有效。适用于PCR用引物， DNA测需用引物，各种探针等。三 HPLC纯化采用高效液相色谱纯化，产物纯度极高，可达99%。适用于各种基因工程试验，特别是：荧光标记 DNA、长链 DNA、 PCR克隆，定点突变，人工合成基因等。HPLC 纯化HPLC 纯化是使用高效液相色谱仪，对目的 DNA 片段进行纯化的方法。 HPLC 纯化的设备投资大，生产成本高，但使用本法纯化的DNA 片段纯度极高，大于 99% 。 HPLC 纯化的操作方法如下。1. 合成高纯度级 DNA 制品时，在全自动 DNA 合成仪上，需自动脱去 DMTr 保护基。2. 将粗样 DNA 注入分离性能极强的离子交换高效液相色谱系统，进行粗检测， 确认主峰位置、目的 DNA 含量等。3. 增加注样量，回收主峰平头部分。此时可达到去除杂质短链 DNA ，纯化目的 DNA 的目的。 为了确保 DNA 的纯度，一般一次的纯化量为 1 OD 左右。4. 将回收后的 DNA 进行纯度检测，确认纯度的可靠性。精品文档...