微生物学检验_大肠菌群计数讲义VIP免费

1 微生物学检验大肠菌群计数大肠菌群coliforms：在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。1、设备和材料：1.1 恒温培养箱： 36 ℃±1 ℃。1.2 冰箱： 2 ℃～5 ℃。1.3 恒温水浴箱： 46 ℃±1 ℃。1.4 天平：感量 0.1 g 。1.5 均质器。1.6 无菌吸管： 1 mL（具 0.01 mL 刻度）、 10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。1.7 无菌锥形瓶：容量500 mL。1.8 无菌培养皿：直径90 mm。1.9 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。2、培养基和试剂2.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（ Lauryl Sulfate Tryptose ，LST）肉汤：见附录 A 中 A.1。2.2 煌绿乳糖胆盐（ Brilliant Green Lactose Bile，BGLB）肉汤：见附录 A 中 A.2。2.3 磷酸盐缓冲液：见附录A 中 A.3。2.4 无菌生理盐水：见附录A 中 A.4。2 2.5 无菌 1 mol/L NaOH：见附录 A 中 A.5。2.6 无菌 1 mol/L HCl ：见附录 A 中 A.6。3 大肠菌群 MPN 计数法大肠菌群 MPN计数的检验程序见图。检样 25 g(mL) 样品 +225 mL 稀释液，均质10 倍系列稀释选择适宜 3 个连续稀释度的样品匀液，接种LST 肉汤管36℃± 1℃ 48h±2h 不产气产气BGLB 肉汤 36℃± 1℃48h±2h 不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查 MPN 表报告结果4 3、 操作步骤3.1 样品的稀释3.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品 , 放入盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min～10000 r/min 均质1 min ～2 min, 制成 1:10 的样品匀液。3.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。3.1.3 样品匀液的 pH 值应在 6.5 ～7.5 之间，必要时分别用 1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl 调节。3.1.4 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液 1 mL，沿管壁缓缓注入 9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1 支 1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。3.1.5 根据对样品污染状况的估计， 按上述操作， 依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次，换用 1 支 1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全...