1 微生物学检验大肠菌群计数大肠菌群coliforms:在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。1、设备和材料:1.1 恒温培养箱: 36 ℃±1 ℃。1.2 冰箱: 2 ℃~5 ℃。1.3 恒温水浴箱: 46 ℃±1 ℃。1.4 天平:感量 0.1 g 。1.5 均质器。1.6 无菌吸管: 1 mL(具 0.01 mL 刻度)、 10 mL(具 0.1 mL 刻度)或微量移液器及吸头。1.7 无菌锥形瓶:容量500 mL。1.8 无菌培养皿:直径90 mm。1.9 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。2、培养基和试剂2.1 月桂基硫酸盐胰蛋白胨( Lauryl Sulfate Tryptose ,LST)肉汤:见附录 A 中 A.1。2.2 煌绿乳糖胆盐( Brilliant Green Lactose Bile,BGLB)肉汤:见附录 A 中 A.2。2.3 磷酸盐缓冲液:见附录A 中 A.3。2.4 无菌生理盐水:见附录A 中 A.4。2 2.5 无菌 1 mol/L NaOH:见附录 A 中 A.5。2.6 无菌 1 mol/L HCl :见附录 A 中 A.6。3 大肠菌群 MPN 计数法大肠菌群 MPN计数的检验程序见图。检样 25 g(mL) 样品 +225 mL 稀释液,均质10 倍系列稀释选择适宜 3 个连续稀释度的样品匀液,接种LST 肉汤管36℃± 1℃ 48h±2h 不产气产气BGLB 肉汤 36℃± 1℃48h±2h 不产气产气大肠菌群阴性大肠菌群阳性查 MPN 表报告结果4 3、 操作步骤3.1 样品的稀释3.1.1 固体和半固体样品:称取25 g 样品 , 放入盛有 225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000 r/min~10000 r/min 均质1 min ~2 min, 制成 1:10 的样品匀液。3.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10 的样品匀液。3.1.3 样品匀液的 pH 值应在 6.5 ~7.5 之间,必要时分别用 1 mol/L NaOH 或 1 mol/L HCl 调节。3.1.4 用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液 1 mL,沿管壁缓缓注入 9 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1 支 1 mL 无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成1:100 的样品匀液。3.1.5 根据对样品污染状况的估计, 按上述操作, 依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次,换用 1 支 1 mL 无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全...