北京大学免疫学免疫学检测原理及应用VIP免费

免疫学应用之一：免疫学检测原理及临床应用第一节、基于抗原-抗体反应的检测方法（一）抗原-抗体反应的特点（二）影响抗原-抗体反应的因素（三）抗原抗体反应检测方法第二节、免疫细胞检测（一）免疫细胞及其亚类计数（二）淋巴细胞功能测定第三节、免疫分子检测（一）免疫球蛋白测定（二）补体测定（三）细胞因子检测（四）CD分子、表面受体和粘附因子的检测（五）HLA分型第四节、免疫学诊断与检测（一）疾病相关因子检测（二）免疫功能检测（三）免疫学监测第一节、基于抗原抗体的检测抗原‐抗体反应（antigen‐antibodyreaction）是指抗原与相应抗体在体内、外发生的高度特异性结合反应。在合适条件下所进行的体外反应中，抗原与相应抗体特异性结合可呈现某种反应现象（如凝集、沉淀）。由于试验所用抗体存在于血清中，故又称血清学反应抗原抗体反应应用：1、用已知抗原检测未知抗体，2、用已知抗体检测未知抗原3、定性或定量检测体内各种大分子物质，用于相关疾病的诊断或辅助诊断；4、用已知抗体检测半抗原物质抗原抗体反应特点：1、特异性2、抗原‐抗体结合的带现象与可见性3、可逆性4、抗原和抗体性第一节、基于抗原抗体的检测第一节、基于抗原抗体的检测抗原‐抗体结合的带现象第一节、基于抗原抗体的检测抗原抗体反应的影响因素：1、酸碱度2、电解质3、温度4、抗原和抗体性质第一节、基于抗原抗体的检测抗原抗体反应检测方法：1、凝集反应：a、直接凝集b、间接凝集c、间接凝集抑制试验d、协同凝集试验e、微粒捕获酶免疫分析技术第一节、基于抗原抗体的检测抗原抗体反应检测方法：2、沉淀反应（１）双向免疫扩散（２）免疫电泳（３）免疫比浊3、补体参与的反应4、免疫标记技术（１）免疫荧光法（２）酶免疫测定（３）免疫组化技术（４）放射免疫测定法（５）免疫胶体金技术（６）化学发光免疫分析（７）免疫印迹法第一节、基于抗原抗体的检测双向免疫示意图第一节、基于抗原抗体的检测免疫电泳示意图第一节、基于抗原抗体的检测酶免疫测定：１）酶联免疫吸附试验第一节、基于抗原抗体的检测酶免疫测定：２）酶联免疫斑点试验第一节、基于抗原抗体的检测酶免疫测定：３）BASELISA‐第一节、基于抗原抗体的检测免疫印记法第二节、免疫细胞检测（一）免疫细胞及其亚类计数1、外周血单个核细胞的分离：外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcell，PB‐MC）包括淋巴细胞和单核细胞，常用葡聚糖‐泛影葡胺（又称淋巴细胞分离液）密度梯度离心法进行分离。其原理为：红细胞和多形核白细胞比重（约１.０９２）大于PBMC（约１.０７５），将抗凝血叠加于分离液（比重１.０７７）液面，通过低速离心可将不同比重的细胞分层：红细胞沉于管底；多形核白细胞密集布于红细胞层与分离液之间；血小板悬浮于血浆中；PBMC则密集于血浆层与分离液界面。第二节、免疫细胞检测（一）免疫细胞及其亚类计数2、淋巴细胞亚群的分离淋巴细胞为不均一群体，可借助其表面标志及功能差异而分为不同群和亚群。（１）尼龙棉柱分离法：将淋巴细胞悬液通过尼龙棉柱，B细胞易与尼龙棉黏附而滞留于柱上，T细胞则不黏附，借此可分离T细胞与B细胞。（２）E花环分离法：成熟的人T细胞表面表达CD２，即绵羊红细胞（SRBC）受体，能与SRBC结合而形成花环，花环形成细胞因比重增大而沉于管底，经密度梯度离心可与其他细胞分离；用低渗法裂解花环中的SRBC，即获得纯化的T细胞。（３）洗淘法（panning）：将抗特定细胞表面标志的抗体包被聚苯乙烯培养板，加入淋巴细胞悬液，表达相应表面标志的细胞即与抗体结合于培养板表面，通过洗涤而将其与悬液中其他细胞分离。（４）流式细胞术（flowcytometry，FCM）：指借助荧光激活细胞分类（fluorescentactivatedcellsorter，FACS）对细胞进行快速鉴定和分类的技术。（５）磁分离技术：将特异性抗体与磁性微粒交联，称为免疫磁珠（immunemagneticbead，IMB）。第二节、免疫细胞检测（一）免疫细胞及其亚类计数3、淋巴细胞亚群计数乃依据淋巴细胞表面标志不同而进行分类计数。常用方法有免疫荧光技术（IF）及细胞毒试验、流式细胞术（FCM）、花环试验及免疫酶染色技术等。...