1 抗菌药物敏感性试验与 细节耐药性监测来源：检验医学在线2009-4-15 南网编辑 2010-7-6 一、需氧菌及兼性厌氧菌的药物敏感试验( 一) 纸片琼脂扩散法纸片琼脂扩散法又称Kirby-Bauer试验，是操作最简易、 使用最广泛的抗菌药物敏感性试验。 1．试验原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含的药物吸收琼脂中的水分溶解后不断向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC) 呈负相关关系，即抑菌圈越大， MIC越小。 2．培养基和抗菌药物纸片 (1)培养基：水解酪蛋白(Mueller-Hin-ton，MH)培养基是 CLSI/NCCLS采用的兼性厌氧菌和需氧菌药敏试验标准培养基，pH值为 7.2 ～7.4 ，对那些营养要求高的细菌如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌、链球菌等需加入补充物质。琼脂厚度为4mm。配制琼脂平板当天使用或置塑料密封袋中4℃保存，使用前应将平板置35℃孵育箱孵育，使其表面干燥。 (2)抗菌药物纸片：选择直径为6.35mm，吸水量为20ul 的专用药敏纸片用逐片加样或浸泡方法使每片含量达到规定所示。含药纸片密封储存2～8℃或 -20 ℃无霜冷冻箱内保存，β - 内酰胺类药敏纸片应冷冻储存，且不超过l 周。使用前将储存容器移至室温平衡l ～2h，避免开启储存容器时产生冷凝水。 3．细菌接种细菌接种采用直接菌落或细菌液体生长方法。用0.5 麦氏比浊标准的菌液浓度。 校正浓度后的菌液应在15min 内接种完毕。 接种步骤如下： ①用无菌棉拭子蘸取菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂片接种3 次，每次旋转60° ，最后沿平板内缘涂抹1 周；②平板置室温下干燥3～5min，用纸片分离器或无菌镊将含药纸片紧贴于琼脂表面；③置35℃孵育箱孵育16～18h 后阅读结果，对甲氧西林和万古霉素药敏感试验结果应孵育24h。 4．结果判断和报告用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径( 抑菌圈的边缘应是无明显细菌生长的区域) ，当葡萄球菌对苯唑西林的药敏试验或肠球菌对万古霉素的敏感试验，围绕纸片周围只要有极少细菌生长提示为耐药。对另外一些菌， 在抑菌圈内散在菌落生长提示可能是混合培养，必须再分离鉴定及试验，也可能提示为高频突变株。变形杆菌迁徙生长使抑菌圈内生成的薄层菌可忽略不计。由于培养基内抗药成分使其对甲氧苄啶引起的轻...
