细胞培养标准操作程序（SOP） 1． 目 的 ： 为 了 保 证 培 养 细 胞 的 正 常 生 长 ， 实 验 技 术 人 员 必 须 明 确 并 正 确 执 行 细 胞 培 养 的 基 本 操 作 步 骤 ，特 制 订实 验 室 细 胞 培 养 操 作 流 程 。 2． 适 用 范 围 ： 适 用 于 来 我 院 细 胞 室 进 行 细 胞 培 养 工 作 的 人 员 。 3． 操 作 规 程 ： 3.1 培 养 液 、 PBS、 胰 蛋 白 酶 的 配 制 3.1.1 1000ml 培 养 液 的 配 制 1、 准 备 用 品 ： 培 养 粉 、 1000ml 烧 杯 、 玻 棒 、 量 筒 、 电 子 分 析 天 平 、 PH 仪 、 2～ 3 天 内 的 新 鲜 三 蒸水 （ 或 新 鲜 反 渗 水 ） 、 NaHCO3 粉 、 1000ml 无 菌 玻 璃 瓶 （ 100ml×10 个 玻 璃 瓶 ） 、 青 霉 素 、 链 霉 素 、 2～ 3个 过 滤 器 、 注 射 器 。 紫 外 线 照 台30min。 2、 将 培 养 粉 用 900ml 新 鲜 三 蒸 水 （ 或 新 鲜 反 渗 水 ） 溶 解 ， 并 冲 洗 袋 内 残 留 粉 末 。 3、充 分 搅 拌 ，按 说 明 添 加 成 分（ 如 Invitrogen 公 司的 RPMI-1640 配 制 1000ml 需加 NaHCO3 粉 2.0g，Invitrogen 公 司的 DMEM 需加 NaHCO3 粉 3.7g 等） ， 再充 分 搅 拌 。 无 需加 谷氨酰胺， 因该培 养 基 里已含有。 4、 用 1M（ 1mol/L） HCl 调PH 至7.0 左右（ 细 胞 适 宜在PH7.2～ 7.4 生 长 ， 配 制 好后PH 值会升高0.2～ 0.3， 故配 时调PH 至7.0 左右） 。 5、 用 新 鲜 三 蒸 水 （ 或 新 鲜 反 渗 水 ） 定容到1000ml。 6、 配 青 霉 素 80 万/瓶 + 4ml 蒸 馏水 溶 解 配 链 霉 素 100 万/瓶 + 4ml 蒸 馏水 溶 解 取0.5ml 青 霉 素 和0.4ml 链 霉 素 加 入到1000ml 培 养 液 中， 使其终浓度均为 100U/ml， 充 分 搅 拌 混匀。 7、 在无 菌 操 作 台 里用 0.22um 的 除菌 滤 膜过 滤 配 制 好的 培 养 液 ， 并 分 装到到100ml 玻 璃 瓶 中， 玻 璃瓶 口用 薄膜封口， 盖上橡皮塞， 放-20℃保 存备 用 。 注 意： （ 1） 配 制 培 养 液 ...
