DC细胞制备标准操作程序VIP免费

DC 细胞制备标准操作程序1目的和范围：1.1 目的：规范 DC 细胞培养操作流程，保证细胞产品制备的稳定性、均一性。1.2 范围：适用于实验室细胞培养技术人员 DC 细胞培养的全过程。2原理：2.1外周血 PBMC 经细胞因子诱导可分化为 DC 细胞。3相关文件：3.1CIK 细胞制备标准操作规程4记录4.1DC-CIK 细胞制备记录。5物料：5.1 试剂：75%酒精，碘伏，生理盐水，淋巴细胞分离液(Ficoll),GT-T551 培养基，自体血清，DC 因子-1，DC 因子-2，肿瘤蛋白等。5.2 仪器设备：生物安全柜，离心机，水浴锅，二氧化碳细胞培养箱，电动移液枪，10ul 移液枪，医用剪刀，医用止血钳,试管架。5.3 耗材：T25 培养瓶(25cm2Flask),T75 培养瓶(75cm2Flask)15ml离心管，50ml 离心管，5ml 移液管，10ml 移液管，200ul 枪头。DC细胞制备 SOP-TC-002第 2页共 7页崇州医院细胞治疗中心标准操作程序7.2分离培养7.2.1 按照《CIK 细胞制备标准操作程序》所述的方式分离提取PBMC。7.2.2接种：7.2.2.1 用 GT-T551 培养基（加 10%自体血清）调整细胞浓度为 5~6x10e/ml，铺入细胞培养瓶中，标记,水平放入 3715%CO 细胞培养箱内，若非透气孔2培养瓶，应拧松瓶盖一圈。7.2.2.2 -3 小时后（拧紧瓶盖），取出，（注意轻拿轻放）经消毒后放入生物安全柜中。7.2.2.3 沿培养瓶反面将细胞悬液全部倒入离心管中。7.2.2.4 用 5mlGT-T551 培养基（加 10%自体血清）刷洗培养瓶，涮洗液也倒入离心管中。7.2.2.5 离心管中细胞悬液做 CIK 培养（详细步骤参照《CIK 细胞制备标准操作程序》）。7.2.2.6 沿原培养瓶反面加入 10mlGT-T551 培养基（加 10%自体血清）。7.2.2.7 加入 DC 因子-1,分装量 10ul/支，每 10ml 培养基可添加 1 支（培养基不足 10ml 时按比例添加）。7.2.2.8 标记，水平放入 371,5%C0 细胞培养箱培养。27.3换液：7.3.1 第一次直接加液 5ml，换液方式如下：DC细胞制备 SOP-TC-002第 4页共 7页崇州医院细胞治疗中心标准操作程序7.3.1.1 准备耗材至生物安全柜：15ml 离心管 1 个，GT-T551 培养基（加 10%自体血清），DC 因子-1；7.3.1.2配制试剂：参考7.2.2.7步骤。7.3.1.3 从 培 养 箱 中 取 出 培 养 瓶 ， 将 离 心 管 中 培 养 基 沿反面倒入培养瓶。7.3.2 第二次开始半量换液，换液方式如下：7.3.2.1 按 7.3.1.1—7.3.1.2 的方式配制预添加量培养基。7.3.2.2 从培养箱中取出...