Lin egen e9600 应用手册 目 录 第 一 章 、 荧 光 定 量 PCR 的 原 理 江 第 二 章 、 Linegene9600 系 列 荧 光 定 量 PCR 仪 通 道 信 息 情 况 说 明 李 第 三 章 、 引 物 与 探 针 设 计 原 则 段 第 四 章 、 编 程 介 绍 顾 第 五 章 、 Linegene9600 的 应 用 及 举 例 李 第 六 章 、 参 考 文 献 顾 第 七章 、 试剂信 息 顾 第 一 章 荧 光定 量 PCR 的 原 理 一、 扩增曲线 描述 PCR 动态进程的曲线即扩增曲线。PCR 的扩增曲线实际上并不是一条标准的指数曲线,而是呈 S 型曲线(如下图)。 荧光定量 PCR 扩增曲线可以分成三个阶段:荧光背景信号阶段(基线期),荧光信号指数扩增阶段(对数期)和平台期。在基线期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化。而在平台期,扩增产物已不再呈指数级的增加。由于PCR 的终产物量与起始模板量之间没有线性关系,所以根据最终的 PCR 产物量不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段,PCR 产物量的对数值与起始模板量之间存在线性关系,可以选择在这个阶段进行定量分析。 二、 荧光阈值(threshold) 一般将 PCR 反应的前 15 个循环的荧光信号作为荧光本底信...