实 验 原 理 蛋 白 质 印 迹 是 把 电 泳 分 离 的 蛋 白 质 转 移 到 固 定 基 质 上 ， 然 后 利 用 抗 原 抗 体 反应 来 检 测 特 异 性 的 蛋 白 分 子 的 技 术 ， 包 括 三 个 部 分 ： SDS— 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 ，蛋 白 质 的 电 泳 转 移 ， 免 疫 印 迹 分 析 。 SDS— 聚 丙 烯 酰 胺 凝 胶 电 泳 主 要 用 于 测 定 蛋 白 质 相 对 分 子 质 量 ，SDS 是 阴 离 子去 污 剂 ， 能 断 裂 蛋 白 质 分 子 内 和 分 子 间 的 氢 键 ，使 分 子 去 折 叠 ， 破 坏 其 高 级 结 构 。SDS 与 大 多 数 蛋 白 质 的 结 合 比 为 1.4:1， 由 于 SDS 带 有 大 量 的 负 电 荷 ， 与 蛋 白 质结 合 时 掩 盖 了 不 同 种 类 蛋 白 质 间 原 有 的 电 荷 差 别 ，使 各 种 蛋 白 质 带 有 相 同 密 度 的负 电 荷 ， 形 似 长 椭 圆 棒 ， 蛋 白 迁 移 率 与 蛋 白 质 相 对 分 子 质 量 的 对 数 呈 线 性 关 系 。因 此 ， 利 用 相 对 分 子 质 量 标 准 蛋 白 所作的 标 准 曲线 ， 可以求得未知蛋 白 的 相 对 分子 质 量 。 电 泳 后 蛋 白 质 分 子 嵌在凝 胶 介质 中， 探针分 子 很难通过凝 胶 孔， 将蛋 白 质 从凝 胶 转 移 到 固 定 基 质 上 可以对 蛋 白 质 进行免 疫 检 测 分 析 。 方法有 两种 ： ①水平半干式转 移 即将凝 胶 和 固 定 基 质 似 三 明治样夹在缓冲液浸湿的 滤纸中间 ， 通电10~30min可完成②垂直湿式转 移 即将凝 胶 和 固 定 基 质 夹在滤纸中间 ， 浸在转 移装置的 缓冲液中， 通电 2~4h 或过夜可完成。 固 定 基 质 通常有 硝酸纤维素膜、聚偏二氟乙烯 膜和 尼龙膜。 蛋 白 质 转 移 到 固 定 化膜上 之后 ， 通过蛋 白 质 染料如丽春红S 检 测 膜上 的 总蛋白 ， 或用 考马斯亮蓝检 测 凝 胶 上 的 蛋 白 剩余量 ， 以验 证转 移 是 否成功。 用 抗 体 作为 探针进行特 异 性 的 免 疫 反 应 检 测 抗 原 蛋 白 ， 分 为 4 步： ①用 非特 异 性 ...
