western内参选择大讨论VIP免费

在 western blot 实 验 中 ， 内 参 的 使 用 是 个 很 重 要 的 部 分 ， 看 到 很 多 站 友 对 内 参 的 选 择 经 常 有 些 疑 问 ， 鉴 于 此 ， 希 望 能 在 一 个 帖 子 里 面 综 合 所 有 相 关 问 题 ， 展 开 讨论 ， 共 同 学 习 。 我 先 提 几 个 ， 抛 砖 引 玉 ， 希 望 大 家 继 续 。 1。 为 什 么 一 定 需 要 内 参 ？ 内 参 的 重 要 性 。 2。 常 用 的 几 种 内 参 。 3。 不 同 的 情 况 如 何 选 择 不 同 的 内 参 。 支 持 一 下 ！ 1： 用 内 参 照 是 为 了 评 价 你 的 各 个 上 样 孔 内 蛋 白 的 总 量 是 否 基 本 一 致 ， 通 常 使 用 一 些 看 家 蛋 白 ， 比 如β-actin、GAPDH 等等。 这些 蛋 白 在 所 有 细胞中 的 表达量 基 本 一 致 ， 所 以用 他们来作为 你 加样 量 的 对 照 。 这样 western 结果中 你 的 目的 蛋 白 经 过处理后发生变化， 而内 参 的 条带基 本 均匀一 致 。 这样 才有 说服力， 表明的 确是 处理因素造成目的 蛋 白 的 变化而不 是 加样 误差或是 人为 造成目的 条带浓度的 变化。 严格意义上说， 内 参 事必须做的 。 2： 常 用 的 内 参 有 ： b-actin， GAPDH， 近 2-3 年， 更详细的 研究发现， β-Tubulin (球管蛋 白 )， 被广泛应用 于 Western Blotting， β－Tubolin 分 子 量 为 55KD 左右。 3： 一 般我 们选 择 内 参 与要 检测的 目的 蛋 白 的 分 子 量 最好相 差 5KD 以上 。 因此 你 要 知道你 检测的 蛋 白 的 分子 量 来选 择 合 适的 内 参 ！ 个 人一 些 见解， 供参 考！ 内 参 的 重 要 性 ， 必要 性 ： 要 检测一 个 基 因的 表达产物是 否 正确， 或者比 较表达产物量 的 相 对 变化， 首选 方法是Western Blot。 因为 Western Blot 操作相 对 简单方便， 既可以定 性 分 析表达产物， 同 时还可以指示目的 蛋 白 量 的 相 对 变化。 虽然， 顺利的 时候 Western Blot 做起来很 简单， 可不 顺的 时候也很 令人心烦――做不 出结果啦、假阳性 啦、结...