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高效液相色谱法高效液相色谱法一、概述一、概述高效液相色谱法高效液相色谱法((highperformanceliquidhighperformanceliquidchromatographychromatography，，HPLCHPLC))它是以经典液相色谱为基础，以微粒型填料作固定相，采用它是以经典液相色谱为基础，以微粒型填料作固定相，采用高压送液泵和各种高灵敏度检测器。因此，高压送液泵和各种高灵敏度检测器。因此，HPLCHPLC法具有分离效法具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高等特点。与气相色谱法比，能高、分析速度快、检测灵敏度高等特点。与气相色谱法比，在体内药物分析中在体内药物分析中HPLCHPLC法具有更广的应用范围。法具有更广的应用范围。随着近年来新型色谱柱和固定相的研制，毛细管电色谱等新随着近年来新型色谱柱和固定相的研制，毛细管电色谱等新的分离模式的出现，色谱仪器的完善以及固相微萃取技术对样的分离模式的出现，色谱仪器的完善以及固相微萃取技术对样品处理的引入，使品处理的引入，使HPLCHPLC法解决实际问题的能力日益增强，特别法解决实际问题的能力日益增强，特别是在体内药物分析中得到广泛的应用，成为开展体内药物分析是在体内药物分析中得到广泛的应用，成为开展体内药物分析工作不可缺少的分离、分析工具。工作不可缺少的分离、分析工具。二、仪器简介贮液瓶贮液瓶(1)(1)中的流动相溶剂经中的流动相溶剂经过滤器过滤器(2)(2)被输液泵被输液泵(3)(3)吸入，经吸入，经压力和流量计后导人进样阀压力和流量计后导人进样阀(4)(4)。。待测样品由进样器注入进样阀，并待测样品由进样器注入进样阀，并随流动相一起通过色谱柱随流动相一起通过色谱柱(5)(5)后进后进入检测器入检测器(6)(6)。检测信号用微机。检测信号用微机(8)(8)采集进行数据处理，记录色谱采集进行数据处理，记录色谱图及色谱峰面积或峰高。制备型色图及色谱峰面积或峰高。制备型色谱仪，可使用馏分收集器谱仪，可使用馏分收集器(7)(7)获得获得制备的样品。对于复杂待测样品，制备的样品。对于复杂待测样品，可采用梯度泵进行梯度洗脱操作，可采用梯度泵进行梯度洗脱操作，使待测样品中的各组分均得到最佳使待测样品中的各组分均得到最佳分离。分离。（一）输液泵输液泵的作用是产生高压输送流动相。采用柱塞往复采输液泵的作用是产生高压输送流动相。采用柱塞往复采用柱塞往复泵，柱塞向前运动流动相溶剂输出，流向色谱柱；用柱塞往复泵，柱塞向前运动流动相溶剂输出，流向色谱柱；柱塞向后运动，将输液瓶中的溶剂吸入缸体；柱塞往复泵具有柱塞向后运动，将输液瓶中的溶剂吸入缸体；柱塞往复泵具有体积小、循环快、流量恒定，泵中保留的溶剂很少，容易清洗体积小、循环快、流量恒定，泵中保留的溶剂很少，容易清洗及更换流动相等特点。泵流速精密度的标准偏差小于及更换流动相等特点。泵流速精密度的标准偏差小于11％；泵％；泵的泵压一般可达到的泵压一般可达到400kg/cm400kg/cm22。。(二)进样器(三)色谱柱11．柱管与柱填料．柱管与柱填料色谱柱由柱管与固定相组成，采用匀浆高压装色谱柱由柱管与固定相组成，采用匀浆高压装柱。色谱柱分为分析型柱和制备型柱两类。分析型柱。色谱柱分为分析型柱和制备型柱两类。分析型的柱长为的柱长为1010～～30cm30cm，内径为，内径为22～～6mm6mm；制备型的；制备型的柱长为柱长为2525～～100cm100cm，内径为，内径为2020～～40mm.40mm.填料类型不同填料类型不同液－固吸附色谱固定相为吸附剂，常用的有硅胶、液－固吸附色谱固定相为吸附剂，常用的有硅胶、氧化铝、分子筛；氧化铝、分子筛；液－液分配色谱固定相一种为物理涂渍固定相，另液－液分配色谱固定相一种为物理涂渍固定相，另一种为化学键合固定相。在药物分析中，多采用硅氧烷一种为化学键合固定相。在药物分析中，多采用硅氧烷型化学键合固定相。化学键合固定相按极性强弱可分为型化学键合固定相。化学键合固定相按极性强弱可分为极性、中等极性和非极性三类。极性键合固定相有氨基、极性、中等极性和非极性三类。极性键合固定相有氨基、氰基键合相等。氰基键合相适用于分析极性和中等极性氰基键合相等。氰基键合相适用于分析极性...