2018高中生物蛋白质和DNA技术第2节DNA片段的扩增——PCR技术学业达标测评中图版1!

第二节 DNA 片段的扩增——PCR 技术一、DNA 在细胞内的复制1．所需的酶：解旋酶、DNA 聚合酶和 RNA 聚合酶等。2．引物：一段 RNA。3．原料：四种脱氧核苷酸。4．原则：碱基互补配对原则。二、PCR 技术的过程1．把 PCR 缓冲液、DNA 模板、一对引物、四种脱氧核苷酸、DNA 聚合酶、Mg 等成分加入到微量离心管中。2．把离心管置于 95℃的高温中，使 DNA 碱基对之间的氢键断裂，DNA 双链拆开成为两条单链。3．将离心管置于 55℃的环境中，使一对引物分别结合到两条分开的模板链上。4．再将离心管转置于72℃的环境中，在DNA 聚合酶的催化下，游离的脱氧核苷酸从引物的一端进行顺次连接，从而形成两条新的子链。这样高温变性、低温复性和中温延伸三个步骤便构成了 PCR 过程的一个循环。三、实验操作1．准备(1)为了避免外源 DNA 等因素的污染，PCR 实验中使用的离心管、吸头、缓冲液以及蒸馏水等在使用前必须进行高压灭菌。(2)如果没有 PCR 仪，可以设置 3 个恒温水浴锅，温度分别为95℃、55℃和 72℃，然后按要求在 3 个水浴锅中来回转移 PCR 的微量离心管即可。2．扩增3．检测利用 DNA 在 260nm 的紫外线波段的吸收值曲线来测定相应含量。即：DNA 的浓度(μg/mL)A260nm＝×稀释倍数。0.02预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中问题 12＋1问题 2问题 3问题 4一、DNA 复制(体内)与 PCR 技术(体外)不同点合成子链在引物基础上，一条链连续合成，另一条链不连续合成边解旋边复制，半保留复制不需要受生物体自身控制体内温和条件①需提供 DNA 复制的模板②四种脱氧核苷酸为原料③都需要一定的缓冲溶液④子链延伸的方向都是从 5′端到 3′端解旋引物体内复制在解旋酶作用下，细胞提供能量，部分解开一小段 RNAPCR 反应加热至 95 ℃左右，双链全部解开，不需解旋酶单链 DNA 分子片段分别从两条链的引物端开始，都是连续合成，控制温度72 ℃体外迅速扩增需要30 多次高温(可变)特点TaqDNA 聚合酶循环次数温度相同点①解旋酶的作用是使 DNA 两条链的氢键断开，而 DNA 聚合酶与 DNA 连接酶都是催化形成磷酸二酯键。②DNA 聚合酶是将单个核苷酸加到已有的单链片段的 3′端上，需要模板，而 DNA 连接酶连接的是两条 DNA 片段的缺口，不需要模板。二、PCR 技术的实验操作程序21．PCR 扩增前的准备高压灭菌移液每次更换吸头准备三个水浴锅↓2．PCR 扩增循环预变...