24/10/241第六章制备色谱分离技术第六章制备色谱分离技术第一节概述第一节概述第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术第三节高速逆流色谱第三节高速逆流色谱第四节制备薄层色谱第四节制备薄层色谱第五节制备柱色谱第五节制备柱色谱第六节亲合色谱第六节亲合色谱24/10/242一、凝胶色谱分离的原理和分类一、凝胶色谱分离的原理和分类第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术24/10/243一、凝胶色谱分离的原理和分类一、凝胶色谱分离的原理和分类第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术24/10/244一、凝胶色谱分离的原理和分类一、凝胶色谱分离的原理和分类第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术24/10/245一、凝胶色谱分离的原理和分类一、凝胶色谱分离的原理和分类第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术样品粒径从大到小逐渐被洗脱出来。24/10/246一、凝胶色谱分离的原理和分类一、凝胶色谱分离的原理和分类第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术凝胶的种类：按材料来源：可分成有机凝胶与无机凝胶两类按凝胶对溶剂的适应范围：可分成亲水性、亲油性和两性凝胶三类。按机械性能：分可分成软胶、半硬胶和硬胶三类。24/10/247第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术二、凝胶的种类及性质二、凝胶的种类及性质用于色谱分离的凝胶，除具有分离的特性外，尚应满足下列几点要求：（1）凝胶骨架在化学上必须是惰性的，即在分离过程中不应与被分离物质发生结合。（2）凝胶的化学稳定性好，应在很宽的pH和温度范围内不起化学变化，不分解。（3）凝胶本身应是中性物质，不含有（或仅含有最少量）能解离的基团，不会产生离子交换现象。（4）具有一定的孔径分布范围；（5）机械强度高，允许较高的操作压力（流速）。24/10/248第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术二、凝胶的种类及性质二、凝胶的种类及性质24/10/249二、凝胶的种类及性质二、凝胶的种类及性质第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术24/10/2410二、凝胶的种类及性质二、凝胶的种类及性质第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术24/10/2411三、凝胶特性参数三、凝胶特性参数第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术排阻极限：指不能进入凝胶颗粒孔穴内部的最小分子的分子量。所有大于排阻极限的分子都不能进入凝胶颗粒内部，直接从凝胶颗粒外流出，所以它们同时被最先洗脱出来。排阻极限代表一种凝胶能有效分离的最大分子量，大于这种凝胶的排阻极限的分子用这种凝胶不能得到分离。例如SephadexG-50的排阻极限为30000，它表示分子量大于30000的分子都将直接从凝胶颗粒之外被洗脱出来。较其小的分子可完全进入凝胶颗粒的微孔中。24/10/2412三、凝胶特性参数三、凝胶特性参数第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术24/10/2413三、凝胶特性参数三、凝胶特性参数1、排阻极限：2、分级范围：能为凝胶阻滞并且相互之间可以得到分离的溶质相对分子质量范围。3、溶胀率：单位重量干硅胶所吸收的水分。4、凝胶粒径：软硅胶：50~150um；硬硅胶：5~50um。5、柱体积：1g干凝胶溶胀后所占有的体积。6、外水体积：又称空隙体积，指凝胶空隙之间的体积。7、内水体积：凝胶的孔隙体积。8、峰洗脱体积：指被分离物质通过凝胶柱所需洗脱液的体积。在洗脱中，从加样到峰顶位置所用的洗脱液体积。第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术24/10/2414四、凝胶色谱分离的步骤四、凝胶色谱分离的步骤1、色谱柱的选择：第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶色谱分离技术一般用玻璃管或有机玻璃管；制备用色谱柱：直径：直径大于2cm，但加样时应该均匀分布于凝胶柱床面上。（柱比：指柱高与直径的比。）高度：凝胶柱分离度与柱高平方呈正比，过高易发生挤压阻塞，长度不超过1m，一般柱长20~30cm，柱比（5:1）~(10:1)。体积：凝胶床体积为样品溶液体积的4~10倍。死体积：精确分离时，死体积不超过总床体积的1/1000。选择色谱柱—选择凝胶--选择溶剂24/10/241524/10/2416四、凝胶色谱分离的步骤四、凝胶色谱分离的步骤2、凝胶的选择：第二节凝胶色谱分离技术第二节凝胶...
