平板划线接种-:;令"令去4 冷•冷却戈 1J 线＜第三区域）划线C 第四区域〉划缠（第五区域）划线（第一区域〉戈 U 线（第二区域〉平扳倒固放遁焙养＜灼烧接种环灼烧接种环灼烧接种环・灼烧按种环灼烧接种环灼烧按种环■冷却--蘸取菌液分离灭菌1 倒平板1 培养1 划线分离LB 液体和固体培养基及培养皿咼压烝汽灭菌将固体培养基倒入 4 个灭菌后的培养皿中，制备平面培养基在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养 12h平板划线法培养皿倒置，37T 恒温培养 12~24 小时稀释涂布法欝oiL（5）@◎工从土壤中分离微生物划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂（一）制备 LB 培养基（通用的细菌培养基）1、配方：蛋白胨 10.0 克，牛肉膏 5.0g，氯化钠 10.0 克，水 1000ml（配固体培养基再加琼脂 20 克）2、流程计算称量-溶解-调 pH-分装-加塞，包扎-灭菌倒平板培养基配制（特）培养基应现配现用，每次配置 350ml，—次性使用完毕。1、按下表称取物资配置 LB 培养基到 500ml 锥形瓶中:例如：配制 350mlLB 培养基配方如下：［配置双份］成分名称蛋白胨TRYPTONE氯化钠酵母提取物YEASTXTRACT去离子水称取质量3.5g3.5g1.75g补足 350ml2、用双层铝箔和棉绳对锥形瓶进行封口，摇晃锥形瓶以使各物质迅速、均匀、完全、溶解。待灭菌。① 分装：注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，因此在将培养基转移到三角瓶或试管中时必须用一三角漏斗。②加塞：试管用塑料盖或棉花塞；三角瓶口用封口膜或_6 层纱布 封口，再用牛皮纸或报纸封口。③包扎：用一 牛皮纸 一 或报纸④灭菌：高压蒸气灭菌法 1）加水：向外层锅内加入适量的水，加水的要求是不触及内胆.2）装锅：物品放置的要求整齐、稳定、留出空隙:加盖：将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的_ 排气槽 —内。再以_ 两两对称 方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。3）加热排气：打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后,关上排气阀。4）保温保压：当锅内压力升到丄 kg/cm2时，控制热源，维持压力至15min。5）出锅：切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力降至_0_时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。否则会因锅内压力较高，打开气阀后造成的压力差可能使容器内的培养基喷溅造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至使容器爆炸。灭菌后，通常将实验用具放入 60°C~80°C 烘箱中...
