AXON 700B SOP 一、准备： 1、相关液体： 大部分细胞外液的 pH 为 7.4，电极内液的 pH 为 7.2-7.3；培养细胞的缓冲体系为 HEPES，而急性分离细胞或者组织切片的缓冲体系多为碳酸盐体系；至于渗透压，细胞内应高于细胞外（如 340mOsmd: 330mOsmd）使细胞微肿胀从而利于封接。所有液体均应用微孔滤膜过滤，ICS 应冻存；如果采用碳酸盐体系，那么实验过程必须灌流。 2、电极： 所用电极控制在 2-5MΩ，电阻值越大则 tip 越细，利于封接而不利于破膜，反之，电阻值越小则 tip 越粗，利于破膜而不利于封接（注意小细胞有时电极电阻也可大于 5MΩ）；电极直径最好为 5-10μm，即对于 400 倍的显微镜下 2-4mm；电极末端可用火烧平，防止刮掉氯化银。 二、电压钳（主要是经典全细胞模式）： （一）入水前 1、液体：细胞外液应预热，早点拿出放置在室温下，取出细胞后用外液荡洗两遍，准确加入 1-2ml 外液（其中 1ml 最佳，可减少跨壁电容）；填充细胞内液的高度以刚好没过银丝为佳，防止电极电阻增大，并用纸吸走残留在电极末端的液体，防止污染夹持器。 将电极插入 holder 中固定，并用注射器给予一定正压（以 5cc 为起点，推到约 4.5cc，相当于 35mbar，0.5psi）。 将参比电极放入细胞外液中。 2、打开监视器（一般用 seal test，也可用示波器），并重置 700B 面板（也可载入设定好的设置），此时为 V-Clamp 模式。将 seal test 视窗监视参数设定为电流（membrane current；primary 中），而示波器可监视输出电压刺激（membrane potential；secondary 中）。 3、在显微镜下找到细胞并调节清楚，显微镜焦点应该在细胞和电极之间。 （二）封接 1、入水后，先 AUTO 液接电位补偿（pipette offset），在视野中出现刺激方波。并记住此时的电极电阻值，注意此时的钳制电位应该为 0mv。此时：（1）方波在大幅度漂移，说明记录电极和参比电极内的银丝含氯不足，需要重新氯化；也可将 MODE 转为 I=0，观察 V 值，该值为电极补偿后的偏差值，如果太大，也需要重镀电极或者清洗 holder；（2）只有噪声和快速尖峰，说明参比电极没有放置准确，检查银丝是否入液或者是否与 headstage 接触；（3）方波太大，电阻值<1 MΩ，说明 tip 已断，要换电极；（4）方波太小，tip 可能太细或者被污物堵住，更换电极或者清洗电极。清洗电极的方法：在 I-Clamp 模式中，反复切换 clear“+”到“—”...
