摘自丁香园：跟大家分享一下小分子蛋白的 western-blot 相关注意事项以及操作技巧：我搞得蛋白质是一个 11KD 的分泌性蛋白，并且是我实验设计中一个重要的指标，最初学习 WB 技术，受困于二抗不合格一直连内参都做不出来
后面改换抗体之后，才相对顺利一点，其他指标也相继出来了
所以抗体真的很重要
但是在做 WB 实验的 7、8 个月过程中，我的核心的一个蛋白一直处于混沌状态，可能跑 30 次能现身一次，现身之后又没影好几个月，就这样捉摸不定，搞得我很烦，但又无可奈何
询问了实验室的同学们，说法各一：1、有人说小分子量蛋白就是难跑，为什么难大家也说不清楚
2、有的说分泌性蛋白本身胞内含量少，不好跑，需要加大上样量，似乎也是实话
3、还有的说小分子量蛋白容易降解，你的蛋白质降解了吧，我姑且信了
但是 95%的时候我跑出的条带都是大白板，纵然我通过 PCR、细胞的免疫荧光都能够发现这个蛋白，但是就是 WB 做不出来，4、也有朋友告诉我说分泌型蛋白你还是做 ELISA 吧，可是一来这个蛋白的 ELISA 试剂盒好贵的，二来我就是想做 WB
所以就开始了上下求索之路
95%的时间跑出来的条带是这样的
这一求索就是几个月的时间
期间一直觉得电泳没什么技术含量，电转的过程才是重点，于是纠结于电转条件；也纠结过电转液的配置等
就在最近，再次翻阅论坛里面大神的回帖，其中一个大神提到：小分子量蛋白容易在电泳过程中弥散，电泳在压缩胶里多压一会，在分离胶里面跑一半就好了
对这个话百思不得其解，于是开始查询一些实验技术方面的文献，其中有几篇文献对我很有启发，其中有些技术原理方面的内容如下：在含 SDS 缓冲液的样品中，小分子多肽的浓缩是较困难的，因为小分子多肽与SDS 形成的复合体具有与 SDS 本身类似的电荷和大小，所以偏离了相对迁移率和分子质量对数的相互关系，因此浓缩对于小
