G418筛选稳定表达细胞系VIP专享

G418 筛选稳定表达细胞系 原理 分析转化的功能和表达需要DNA 稳定转染至宿主细胞染色体。外源基因进入细胞后，部分能够通过细胞质进入细胞核内，根据细胞类型，至多80％的进入核内的外源DNA 得到瞬时表达。极少数情况下，进入细胞的外源DNA 通过系列非同源性分子间重组核连接，形成巨大的***结构最终整合进细胞染色体。细胞基因组自由部分表达，所以整合并不一定意味着表达，只有整合到表达区的基因才会表达，而且整合到不同的染色体区段的外源基因的表达的量也是不同的。由于摄取、整合、表达外源基因是小概率事件，通常根据新表型筛选稳定转染体。一般情况下这种新表型由共转染的编码抗生素抗性基因提供。细菌 Tn5 转座子序列（neo 抗性基因）携带的氨基糖苷磷酸转移酶可以将G418 转变成无毒形式。G418 是一种氨基糖类抗生素，其结构与新霉素、庆大霉素、卡那霉素相似，它通过影响80S 核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核等细胞都 有毒性 ,包 括 细菌、酵 母 、植 物 和哺 乳 动 物 细胞 ,也包 括 原生动 物 和蠕 虫 。是稳定转染最常用 的选择 试 剂 。当 neo 基因被 整合进真核细胞基因组合适 的地 方 后 ,则 能启 动 neo 基因编码的序列转录 为 mRNA,从 而获 得抗性产 物 氨基糖苷磷酸转移酶的高 效 表达 ,使 细胞获 得抗性而能在 含 有Ｇ 418 的选择 性培 养 基中 生长 。Ｇ 418 的这一选择 特 性 ,已 在 基因转移、基因敲 除 、抗性筛选以及 转基因动 物 等方 面 得以广 泛 应 用 。 在 进行 转染时细胞膜 受 到影响，抗生素可能对细胞产 生较 大影响，加 上 G418 有杀 菌作 用 ，所以有人 主张 转让 时不加 其它抗生素。其实 G418 本 身 有很 好 的杀 菌效 果 ，在 用 G418 进行 筛选的过程 中 很 少会发 生污 染。但 有一点 ，其实 我 觉 得问 题 也不是很 大，那就 是： 在 老 外的一本 实 验手 册 中 提到，在 脂 质体转染时所用 培 养 基中 最好 不加 任 何 抗生素。我 想 他 的想 法 可能是脂 质体对细胞膜 有影响，可能此 时加 抗生素对细胞损 伤 较 大。因为 庆大霉素、链 霉素、G418 均 是氨基糖甙 类药 物 ，其药 理作 用 完 全 一样 。所以没 有必 要再 用 ，而且由于另 外抗生素的添 加 实 际 增 加 氨基糖甙 类药 物 的浓...