分子生物学考试复习题

答：PCR 是在试管中进行的 DNA 复制反应，基本原理是依据细胞内 DNA 半保留复制的机理，以及体外 DNA 分子于不同温度下双链和单链可以互相转变的性质，人为地控制体外合成系统的温度，以促使双链 DNA 变成单链，单链 DNA 与人工合成的引物退火，然后耐热 DNA 聚合酶以 dNTP 为原料使引物沿着单链模板延伸为双链 DNA。PCR 全过程每一步的转换是通过温度的改变来控制的。需要重复进行 DNA 模板解链、引物与模板 DNA 结合、DNA 聚合酶催化新生 DNA 的合成，即高温变性、低温退火、中温延伸 3个步骤构成 PCR 反应的一个循环，此循环的反复进行，就可使目的 DNA 得以迅速扩增。DNA 模板变性：模板双链 DNA?单链 DNA，94°C。退火：引物+单链 DNA?杂交链，引物的 Tm 值。引物的延伸：温度至 70C 左右，TaqDNA 聚合酶以 4 种 dNTP 为原料，以目的 DNA 为模板，催化以引物 3 末端为起点的 5-3DNAS 延伸反应，形成新生 DNA 链。新合成的引物延伸链经过变性后又可作为下一轮循环反应的模板 PCR，就是如此反复循环，使目的 DNA 得到高效快速扩增。2.DDDDDDDDDD答：通过 DNA 同源重组，使得胚胎干细胞特定的内源基因被破坏而造成功能丧失，然后通过胚胎干细胞介导得到该基因丧失的小鼠模型的过程称为基因敲除。1、打靶载体的构建：同源序列要足够长，要含有筛选用的标志基因。2、胚胎干细胞的体外培养 3、打靶载体导入胚胎干细胞 4、同源重组胚胎干细胞的筛选 5、基因敲除胚胎干细胞注射入胚泡 6、胚泡植入假孕小鼠的子宫中 7、杂交育种获得纯合的基因敲除动物3.DDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDDD答；原核基因表达调控特点：⑴ RNA 聚合酶只有一种，其 o 因子决定 RNA 聚合酶识别特异性；⑵操纵子模型的普遍性；⑶阻遏蛋白与阻遏机制的普遍性（负性调节占主导）；⑷转录和翻译偶联进行；⑸转录后修饰、加工过程简单；⑹转录起始是基因表达调控的关键环节。真核基因表达调控特点：（l）RNA 聚合酶有三种，分别负责三种 RNA 转录，每种 RNA 聚合酶由约 10 个亚基组成；⑵活性染色质结构发生变化；⑶正性调节占主导；⑷转录和翻译分隔进行；⑸转录后修饰、加工过程较复杂；⑹转录起始是基因表达调控的关键环节。(1) 原核生物和真核生物基因表达调控的共同点：a 结构基因均有调控序列；b 表达过程都具有复杂性，表现为多环节；c 表达的时空性，表现为不同发育阶段和不同组织器官上的表达的复...