精品文档---下载后可任意编辑AF-hTERT-TK/GCV 靶向抗肝癌及旁观者效应的讨论的开题报告讨论背景：肝癌是一种世界范围内发生率及死亡率较高的癌症，晚期肝癌预后极差，传统的肝癌治疗手段如手术、放疗和化疗等效果不佳。目前，基因手段的应用为肝癌治疗提供了新思路。AF-hTERT-TK/GCV 基因治疗是近年来的新兴治疗方法，该疗法通过将癌细胞中转录酶反转录逆转录酶（hTERT）与激酶（TK）基因表达的负式调节元件结合，构建出hTERT-TK 基因表达载体，进而选择性地杀伤肝癌细胞。讨论目的：本讨论旨在通过构建以 AF-hTERT-TK/GCV 为载体的基因治疗方法，探究其靶向抗肝癌以及旁观者效应的作用机制，为临床治疗肝癌提供新的方案。讨论内容：1.构建 AF-hTERT-TK/GCV 基因载体。选取 hTERT-TK 基因诱导AD293 细胞 STbyFlp-In™系统的稳定表达，进而构建出 AF-hTERT-TK/GCV 基因载体。2.体外实验验证 AF-hTERT-TK/GCV 基因治疗的肝癌抑制效应。将AF-hTERT-TK/GCV 基因载体转染至肝癌细胞株 HepG2、SMMC-7721、BEL-7402 等，通过 CCK-8 法、MTT 法、流式细胞术等方法检测空载体组、质粒组、GCV 单独组、AF-hTERT-TK/GCV 组的杀伤率、增殖活性等指标。3.体内实验验证 AF-hTERT-TK/GCV 基因治疗的抗肝癌效应。将肝癌裸鼠随机分为空载体组、质粒组、GCV 单独组、AF-hTERT-TK/GCV组，观察肿瘤抑制作用、生存期、肝功能等指标，并探究旁观者效应的潜力。4.从分子水平探究 AF-hTERT-TK/GCV 基因治疗肝癌的机制，分析其对细胞周期和凋亡的调控、对靶向杀伤肝癌细胞的机制等方面的作用机理。讨论意义：精品文档---下载后可任意编辑本讨论将为肝癌治疗提供一个新的基因治疗思路，在探究肝癌治疗靶向杀伤的作用机理之外，还有目的性地利用旁观者效应，从分子水平探究影响肝癌治疗效果的因素，为肝癌治疗的实践应用提供了重要的理论前提。
