单抗制备过程

动物的选择与免疫 1. 动物的选择：纯种 BALB/C 小鼠 2. 免疫方案：根据抗原的特性不同而定。 （1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。 初次免疫 抗原 1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般 0.8～1ml,0.2ml/点） ↓3 周后 第二次免疫 剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或 ip（腹腔内注射）（ip 剂量不宜超过 0.5ml） ↓3 周后 第三次免疫 剂量同一，不加佐剂，ip（5～7 天后采血测其效价） ↓2～3 周 加强免疫，剂量 50～500μg为宜，ip 或 iv（静脉内注射） ↓3 天后 取脾融合 目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。 细胞融合 （1） 主要试剂的配制 a、 细胞培养基 杂交瘤技术中使用的细胞培养基主要有 RPMI-1640 或 DMEM（Dulberco Modified Eagles Medium）两种基础培养基，具体配制方法按厂家规定的程序，配好后过滤除菌（0.22um），分装，4℃保存。 b、 氨基喋呤（A）贮存液（100×，4×10-5mol/L） : 称取 1.76mg 氨基喋呤（Aminopterin MW 440.4），溶于 90ml 超纯水或四蒸水中，滴加 1mol/L NaOH 0.5ml 中和，再补加超纯水或四蒸水至 100ml。过滤除菌，分装小瓶（2ml/瓶），-20℃保存。 c、 次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷（HT）贮存液(100×,H:10-2mol/L，T：1.6×10-3mol/L): 称取 136.1mg 次黄嘌呤(Hypoxanthine,MW 136.1)和 38.8mg 胸腺嘧啶核苷(Thymidine,MW 242.2)，加超纯水或四蒸水至 100ml，置 45-50℃水浴中使完全溶解，过滤除菌，分装小瓶（2ml/瓶），-20℃冻存。用前可置 37℃加温助溶。 d、 L-谷氨酰胺（L.G.）溶液（100×，0.2mol/L） : 称取 2.92g L-谷氨酰胺（L-glutamine，MW 146.15），用 100ml 不完全培养液或超纯水（或四蒸水）溶解，过滤除菌，分装小瓶（4-5ml/瓶），-20℃冻存。 e、 青、链霉素（双抗）溶液（100×）: 取青霉素 G（钠盐）100 万单位和链霉素（硫酸盐）1g，溶于 100ml 灭菌超纯水或四蒸水中，分装小瓶（4-5ml/瓶），-20℃冻存。 f、 7.5% NaHCO3 溶液 : 称取分析纯 NaHCO3 7.5g，溶于 1...