精品文档---下载后可任意编辑LOX-1 体外讨论模型的建立及其功能检测的开题报告一、论文选题背景氧化低密度脂蛋白受体 1（lymphocyte oxidized LDL receptor-1, LOX-1）是一种单一跨膜蛋白，可通过结合低密度脂蛋白的氧化产物，发挥介导炎症反应、促进血管内皮细胞凋亡、参加脂代谢和动脉粥样硬化等生物学功能，是一种新型的危险因素与治疗靶点。因此，建立 LOX-1 体外讨论模型进行其功能检测具有重要意义。二、讨论目的本文主要讨论目的是利用质粒转染技术，构建 LOX-1 高表达的细胞模型，采纳 Western blotting、流式细胞术、蛋白质交联等技术手段，分析并验证该体外细胞模型对 LOX-1 特异性结合、内源性表达及氧化低密度脂蛋白的介导影响等功能。三、讨论内容和方法1.质粒构建：将 LOX-1 cDNA 克隆到真核表达质粒载体上，经过序列验证后转染入 HEK293E 细胞中。2.Western blotting：将采集的细胞样品经过蛋白质电泳分离，转移到 PVDF 膜上，用 LOX-1 特异抗体进行植物过表达蛋白的检测，并以β-actin 作为内部对比。3.流式细胞术：用流式细胞术检测 LOX-1 在单个细胞上的表达情况，并用氧化低密度脂蛋白进行刺激，观察对 LOX-1 的影响。4.蛋白质交联：利用可交联化学物质对细胞和膜上的 LOX-1 进行交联，并进行 Western blotting 检测 LOX-1 的交联情况。四、讨论意义本文将建立 LOX-1 高表达细胞模型，为进一步讨论其功能及发挥作用提供了必要条件，并为 LOX-1 作为新型危险因素和治疗靶点的相关讨论提供了一定的参考意义。
