精品文档---下载后可任意编辑RNAi 介导抑制 MCF-7 细胞中 VEGF 基因表达的开题报告背景：VEGF 是肿瘤细胞分泌的重要因子，具有促进肿瘤生长、血管生成和迁移的作用，在肿瘤治疗中受到广泛关注。RNA 干扰（RNAi）技术可以特异地沉默目标基因的表达，从而抑制其功能。本实验旨在探究 RNAi技术介导 VEGF 基因的抑制在 MCF-7 细胞中是否可行，以及对细胞的影响。实验设计：实验设计分为两个部分，第一部分是抑制 VEGF 基因表达，并检测其对 MCF-7 细胞生长和凋亡的影响；第二部分是检测 VEGF 蛋白的表达水平和分泌量的变化。实验步骤：1.设计 VEGF siRNA 序列，合成并纯化 siRNA；2.将 MCF-7 细胞平均分为三组：1）阴性对比组，转染 scrambled siRNA；2）阻遏组，转染 VEGF siRNA；3）对比组，不进行转染处理。3.利用逆转录 PCR 检测 VEGF mRNA 表达水平，Western blotting 检测 VEGF 蛋白表达水平，ELISA 检测 VEGF 分泌量，在10、20、30、40、50、60h 后分别进行检测。4.利用 MTT 法检测细胞增殖情况，Annexin V/PI 双染法检测细胞凋亡情况。5.统计数据并进行相关分析。预期结果：估计在转染 VEGF siRNA 的组别中，可显著抑制 VEGF mRNA 和蛋白的表达，并降低 VEGF 的分泌量，表明 VEGF siRNA 的介导抑制效果显著。同时，由于 VEGF 在 MCF-7 细胞中是一个非常重要的生长因子，因此估计 VEGF 的抑制会产生不利的影响，如减缓细胞增殖，并促进细胞凋亡，这些结果将通过 MTT 法和 Annexin V/PI 双染法进行验证。意义：精品文档---下载后可任意编辑探究 siRNA 介导的基因沉默技术对于肿瘤生长和进展的影响，为开发基于 RNAi 技术的肿瘤治疗提供实验基础。并且，此实验结果有望为肿瘤治疗提供新的思路和方法。
