精品文档---下载后可任意编辑三黄鸡 CD4 胞外区基因的克隆表达及其多抗的制备的开题报告一、背景和讨论意义三黄鸡，是一种中国本土土鸡品种，具有生长快、产蛋多、适应性强等优点，因此在农业生产中得到了广泛应用。CD4 是一种重要的免疫细胞表面膜受体，对机体的免疫调节起着重要作用。前人讨论发现，CD4 胞外区基因的多态性与机体的免疫应答有关，因此对 CD4 胞外区基因的讨论在深化理解鸡的免疫机制、筛选强免疫应答群体等方面具有重要意义。二、讨论内容和方法本讨论旨在从三黄鸡中克隆 CD4 胞外区基因，并制备多抗以进一步讨论其生物学功能。具体讨论内容和方法如下：1. 从三黄鸡中提取总 RNA，反转录合成 cDNA。设计 CD4 胞外区的特异性引物，PCR 扩增 CD4 胞外区基因的全长序列。2. 将扩增得到的 CD4 胞外区基因的全长序列克隆到表达载体 pET-32a(+)中，构建原核表达载体。转柿霜菌表达 CD4 胞外区基因，并通过 Ni-NTA 柱纯化得到目的蛋白。3. 等量混合目的蛋白与 Freund's 完全佐剂，免疫 BALB/c 小鼠，观察小鼠的免疫应答情况。分别在第 0、14、21、28 天采集小鼠血清，制备 CD4 胞外区基因的多抗。4. 对制备的多抗进行纯化和鉴定，检测多抗对 CD4 胞外区基因的特异性和亚型。三、预期结果和价值1. 从三黄鸡中克隆 CD4 胞外区基因的全长序列，并构建原核表达载体，实现目的蛋白在大量表达和纯化。2. 制备出对 CD4 胞外区基因有特异性的多抗，可用于检测 CD4 胞外区基因在机体免疫调节中的作用。3. 为深化了解三黄鸡的免疫机制、筛选强免疫应答群体等提供实验依据。
