精品文档---下载后可任意编辑细胞培育标准操作程序（SOP）1．目的：为了保证培育细胞的正常生长，实验技术人员必须明确并正确执行细胞培育的基本操作步骤，特制订实验室细胞培育操作流程。2．适用范围：适用于来我院细胞室进行细胞培育工作的人员。3．操作规程： 培育液、PBS、胰蛋白酶的配制 1000ml 培育液的配制 1、准备用品：培育粉、1000ml 烧杯、玻棒、量筒、电子分析天平、PH 仪、2～3 天内的新奇三蒸水（或新奇反渗水）、NaHCO3 粉、1000ml 无菌玻璃瓶（100ml×10 个玻璃瓶）、青霉素、链霉素、2～3 个过滤器、注射器。紫外线照台 30min。2、将培育粉用 900ml 新奇三蒸水（或新奇反渗水）溶解，并冲洗袋内残留粉末。3、充分搅拌，按说明添加成分（如 Invitrogen 公司的 RPMI-1640 配制 1000ml 需加 NaHCO3 粉，Invitrogen 公司的 DMEM 需加 NaHCO3 粉等），再充分搅拌。无需加谷氨酰胺，因该培育基里已含有。4、用 1M（1mol/L）HCl 调 PH 至左右（细胞适宜在～生长，配制好后 PH 值会升高～，故配时调 PH至左右）。5、用新奇三蒸水（或新奇反渗水）定容到 1000ml。6、配青霉素 80 万 / 瓶 + 4ml 蒸馏水 溶解 配链霉素 100 万 / 瓶 + 4ml 蒸馏水 溶解 取青霉素和链霉素加入到 1000ml 培育液中，使其终浓度均为 100U/ml，充分搅拌混匀。7、在无菌操作台里用的除菌滤膜过滤配制好的培育液，并分装到到 100ml 玻璃瓶中，玻璃瓶口用薄膜封口，盖上橡皮塞，放-20℃保存备用。注意：（1）配制培育液及调节培育液 PH 值所使用的 HCl 和（或）NaOH 均需新奇三蒸水（或新奇反渗水）配制。 一般于配制当天制备，以保证水的纯度和质量。（2）准备的 100ml×10 个玻璃瓶必须事先高压灭菌 ！烧杯、量筒、玻棒、盛新奇三蒸水（或新奇反渗 水）的容器均不需高压灭菌，干净即可。 PBS （平衡盐溶液）的配制 NaCl 8g KCl ＋新奇三蒸水（或新奇反渗水）至 1000ml Na2HPO4*H2O KH2PO4 （1） 无需调 PH 值，其成分溶解后 PH 为，不需除菌滤膜过滤除菌，放于 4℃保存，用前直接高压灭菌（高压时，装 PBS 的瓶子的瓶盖要插针头 !） （2） Na2HPO4*H2O 则 Na2HPO4*12 H2O 需 （3） 如欲配制 500ml，以上成分减半即可 % 胰蛋白酶的配制 胰蛋白酶粉 EDTA（乙二胺四乙酸二钠） NaCl 1精品文档---下载后可任意编辑 KCl ` +新奇三蒸水（或新奇反渗水）至 100...
