沙门氏菌检测 1 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: 1.1 冰箱:2℃~5℃。 1.2 恒温培养箱:36℃±1℃,42℃±1℃。 1.3 均质器。 1.4 振荡器。 1.5 电子天平:感量0.1g。 1.6 无菌锥形瓶:容量500ml,250ml。 1.7 无菌吸管:1ml(具0.01ml刻度)、10ml(具0.1ml刻度)或微量移液器及吸头。 1.8 无菌培养皿:直径90mm。 1.9 无菌试管:3mm×50mm、10mm×75mm。 1.10 无菌毛细管。 1.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 1.12 全自动微生物生化鉴定系统。 2 培养基和试剂 2.1 缓冲蛋白胨水(BPW):见附录中1。 2.2 四硫磺酸钠煌绿(TTB)增菌液:见附录中2。 2.3 亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液:见附录中3。 2.4 亚硫酸铋(BS)琼脂:见附录中4。 2.5 HE琼脂:见附录中5。 2.6 木糖赖氨酸脱氧胆盐(XLD)琼脂:见附录中 6。 2.7 沙门氏菌属显色培养基。 2.8 三糖铁(TSI)琼脂:见附录中7。 2.9 蛋白胨水、靛基质试剂:见附录中8。 2.10 尿素琼脂(pH7.2):见附录中9。 2.11 氰化钾(KCN)培养基:见附录中10。 2.12 赖氨酸脱羧酶试验培养基:见附录中11。 2.13 糖发酵管:见附录中12。 2.14 邻硝基酚β-D半乳糖苷(ONPG)培养基:见附录中13。 2.15 半固体琼脂:见附录中14。 2.16 丙二酸钠培养基:见附录中15。 2.17 沙门氏菌O和H诊断血清。 2.18 生化鉴定试剂盒。 3 操作方法 3.1 试验前准备 3.1.1 将供试品及所有已灭菌的平皿、锥形瓶、匀浆杯、试管、量筒、吸管(1ml、10ml)、稀释剂等移至操作室内。准备好足够用量,避免操作中出入操作间。 3.1.2 开启无菌室紫外杀菌灯和洁净工作台的空气过滤装置 30min。 3.1.3 操作人员用肥皂洗手,关闭紫外杀菌灯,进入缓冲间,换工作鞋,用消毒液洗手或用乙醇棉球擦手,穿戴好无菌衣、帽、口罩、手套等。 3.1.4 操作前先用乙醇棉球擦手、工作台面,再用乙醇棉球擦拭供试品瓶、盒、袋等的开口处周围,待干后用灭菌剪刀或镊子将供试品启封。 3.2 前增菌 称取25g(ml)样品放入盛有225ml BPW的无菌均质杯中,以8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或置于盛有225ml BPW的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min。若样品为液态,不需要均质,振荡混匀。如需测定pH值,用1mol/ml无菌NaOH或HCl调pH至6.8± 0.2。无菌操作将样品转至500ml锥形瓶中,如使用均质袋,可直接进行培养,...